[发明专利]液相色谱质谱联用法定量检测儿茶酚胺及其代谢物的方法

权利要求书

1.一种液相色谱质谱联用法定量检测儿茶酚胺及其代谢物的方法，其主要步骤为：

1)样本预处理；

2)经预处理的样本溶液进行固相萃取，提取血浆中儿茶酚胺及其代谢物；

3)通过液相色谱质谱联用法特异性检测每种分析物及其内标，将分析物与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定分析物浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，质谱分析采用多反应监测扫描，多反应监测扫描是将第一级质谱设定为用于筛选特定的母离子，在第二级质谱中指定所需的产物；分析物及其内标特异多反应监测扫描离子对在色谱分离过程中被连续监测，仅有在特定多反应监测模式(MRM)在正确分析保留时间被记录时信号才能被定量。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，样本预处理的过程为：

A)血浆样本的离心

取EDTA抗凝的待检测全血离心得到血浆，将上述血浆于-80℃冷冻下保存至分析前备用；

B)移取含有乙酸铵水溶液配制的内标工作液加入血浆中，涡旋混匀制成复溶液。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，复溶液经过液相色谱三重四级杆串联质谱仪检测后分别得出甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)、3-甲氧基酪胺(3-MT)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的色谱图及其对应内标液中的甲氧基肾上腺素-D3、甲氧基去甲肾上腺素-D3、3-甲氧基酪胺-D4、肾上腺素-D6、去甲肾上腺素-D6和多巴胺-D4的色谱图。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，固相萃取血浆中儿茶酚胺和甲氧基肾上腺素类物质的过程为：

移取预处理的血浆样本溶液

A)依次采用含有甲酸的乙腈溶液、乙酸铵水溶液对固相萃取板进行活化；

B)移取预处理的血浆样本溶液至固相萃取板，依次用乙酸铵水溶液、乙腈或甲醇或异丙醇进行清洗，加入含有甲酸的乙腈溶液洗脱，将洗脱液于氮气室温下吹干，用流动相A进行复溶，得到待测样品。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，通过液相色谱质谱联用法特异性检测每种分析物及其内标，将分析物与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定分析物浓度的过程为：

采用梯度洗脱反相色谱法对分析物进行分离，色谱柱为PFP柱，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，二者均含有0.1％-1％有机酸，其中有机酸为甲酸、乙酸中的一种或者一种以上，A相:B相体积比为95％-20％:5％-80％，流速为0.2-1ml/min；

质谱检测采用电喷雾离子源和多反应监测模式，各分析物检测离子对分别为：

MN,180.1>148.3；MN-D3,183.1>151.1；NMN,166.1>134.1；NMN-D3,169.1>137.1；3-MT,151.1>91.1；3-MT-D4,155.1>95.1；E,166.1>135.1；E-D6,172.1>112.1；NE,152.1>107.1；NE-D6,158.1>111.3；DA,137.1>91.1；DA-D4,141.1>95.1。