[发明专利]一种脂肪体及其在评价待测蛋白与脂滴相互作用中的应用

权利要求书

1.一种制备脂肪体的方法，包括步骤：a1）将磷脂和甘油三酯在缓冲液中进行涡旋以实现两者的反应，然后进行离心，收集上层液相，从上层液相中分离得到脂肪体；

所述“从上层液相中分离得到脂肪体”包括如下步骤：

a2）将所述上层液相进行两次以上的纯化；每次纯化的方法为：将上层液相与所述缓冲液混匀，然后使其分层，收集上层液相；

a3）将步骤a2）得到的上层液相与所述缓冲液混合，然后使其分层，收集下层液相，其中含有脂肪体；

所述步骤a2）中，所述“使其分层”是通过离心实现的，所述离心的参数为：18000～22000g、3～7min；

所述步骤a3）中，所述“使其分层”是通过离心实现的，所述离心的参数为：800～1200g、3～7min；

磷脂和甘油三酯的质量比为d1）至d6）中的任一种：d1）0.25～3:5；d2）3:5；d3）2:5；d4）1:5；d5）1:10；d6）1:20；

所述磷脂为DOPC和PI；

所述磷脂中，DOPC和PI的质量比为（4-249）：1。

2.采用权利要求1所述方法制备的脂肪体。

3.权利要求2所述脂肪体在制备人工脂滴、人工脂蛋白和/或药物载体中的应用。

4.人工脂滴在制备药物载体或制备药物中的应用；所述人工脂滴是通过在权利要求2所述脂肪体上招募一种或几种固有蛋白和/或功能蛋白获得的。

5.人工脂蛋白在制备药物载体或制备药物中的应用；所述人工脂蛋白是通过在权利要求2所述脂肪体上招募一种或几种载脂蛋白获得的。

6.权利要求2所述脂肪体在检测待测蛋白在脂滴上的结构、形态和密度中至少一种的应用。

7.权利要求2所述脂肪体的应用，为c1）至c3）中的任一种：

c1）评价待测蛋白和脂滴相互作用；

c2）检测待测蛋白和脂滴的亲和力；

c3）检测ATGL酶活性。

8.权利要求2所述脂肪体在分析待测蛋白中氨基酸残基的位置和/或种类对待测蛋白在脂滴的定位中的应用。

9.一种检测待测蛋白和脂滴的亲和力的方法，包括如下步骤：

d1）将不同浓度的待测蛋白和权利要求2所述脂肪体混合，孵育，然后检测脂肪体上的蛋白质；

d2）完成步骤d1）后，以蛋白浓度为横坐标，脂肪体结合蛋白浓度为纵坐标，绘制标准曲线；

d3）完成步骤d2）后，Scatchard分析计算待测蛋白和脂肪体的亲和力，该亲和力即为待测蛋白和脂滴的亲和力。