[发明专利]一种检测靶核酸的试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种检测靶核酸的试剂盒及方法。所述试剂盒包括试纸条、探针，以及用于特异性PCR扩增靶核酸的上游引物和下游引物；其中，上游引物用于扩增正义片段，下游引物用于扩增反义片段，上游引物或下游引物标记有第一抗原，探针标记有第二抗原；当上游引物标记有第一抗原时，探针能够与正义片段特异性配对，探针与正义片段特异性配对后得到正义配对片段；当下游引物标记有第一抗原时，探针能够与反义片段特异性配对，并探针与反义片段特异性配对后得到反义配对片段；试纸条用于检测正义配对片段或反义配对片段，试纸条上由近及远的载有第一抗原的第一抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体，第一抗体标记有信号剂。

技术领域

本发明提供了一种检测靶核酸的试剂盒及方法。

背景技术

结核病是全世界由单一致病菌引起死亡人数最多的疾病。目前我国仍是全球30个结核病高负担国家之一，每年新发结核病患者约90万例，位居全球第3位。

目前应用于结核分枝杆菌复合群诊断的技术有很多种。其中，传统的涂片抗酸染色和细菌培养方法在一些结核病人中可能造成误诊或漏诊。分子检测技术的灵敏度在理论上可达一个结核分枝杆菌，灵敏度高，且短时间即可出报告，可以对结核病人早期诊断，并可以鉴别诊断肺结核和肺癌，但是普通PCR扩增或等温扩增反应容易产生非特异性扩增产物而导致假阳性判读结果，而且在实验室环境有限时极易由核酸扩增产物污染造成检测结果的假阳性；而荧光定量PCR虽然实现了不开盖的检测，提高了检测的特异性，但是由于检测仪器和检测试剂昂贵，限制了其在基层单位上的使用；等温胶体金试纸条使得基因检测更加简便，但是不能解决基因的非特异扩增问题而且目前市场上几乎所有的基因检测试剂盒的质控体系不完整不全面，一般只包含扩增质控，信号剂显示质控，而对于样本采集质量和样本核酸提取质量均缺乏质控。

发明内容

本发明之一提供了一种试剂盒，其包括：试纸条、第一探针，以及用于特异性PCR扩增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物；其中，

所述第一上游引物用于扩增所述靶核酸的第一正义片段，所述第一下游引物用于扩增所述靶核酸的第一反义片段，所述第一上游引物或所述第一下游引物标记有第一抗原，所述第一探针标记有第二抗原；当所述第一上游引物标记有第一抗原时，所述第一探针能够与所述第一正义片段特异性配对，并且在所述第一探针与所述第一正义片段特异性配对后得到第一正义配对片段；当所述第一下游引物标记有第一抗原时，所述第一探针能够与所述第一反义片段特异性配对，并且在所述第一探针与所述第一反义片段特异性配对后得到第一反义配对片段；

所述试纸条用于检测所述第一正义配对片段或所述第一反义配对片段，所述试纸条上由近及远的载有所述第一抗原的抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体，所述第一抗原的抗体标记有信号剂。

在一个具体实施方式中，所述试剂盒中还包括第二探针，和用于特异性PCR扩增质控核酸的第二上游引物和第二下游引物，其中，

所述第二上游引物用于扩增所述质控核酸的第二正义片段，所述第二下游引物用于扩增所述质控核酸的第二正义片段，所述第二上游引物或所述第二下游引物标记有所述第一抗原，所述第二探针标记有第三抗原；当所述第二上游引物标记有第一抗原时，所述第二探针能够与所述第二正义片段特异性配对，并且在所述第二探针与所述第二正义片段特异性配对后得到第二正义配对片段；当所述第二下游引物标记有第一抗原时，所述第二探针能够与所述第二反义片段特异性配对，并且在所述第二探针与所述第二反义片段特异性配对后得到第二反义配对片段；

所述第一抗原、第二抗原和第三抗原两两不同；

所述试纸条还用于检测所述第二正义配对片段或所述第二反义配对片段；所述试纸条上还包被有在反应后形成质控线的第三抗原的第三抗体，且所述检测线与所述质控线间隔平行排列。