[发明专利]一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明公开了一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用。该普洱茶树叶片内生芽孢杆菌的名称为贝莱斯芽孢杆菌FZ06(Bacillus velezensis FZ06)，于2019年10月25日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019854。该菌能产生的脂肽类物质，包括3大类27种，其丰富度多于目前已有报道的贝莱斯芽孢杆菌；产生的脂肽类物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、黄曲霉和寄生曲霉等病原菌具有明显的抑制活性作用，能很好地应用于抑制病原菌中。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用。

背景技术

脂肽(Lipopeptide)是一类重要的非离子型生物表面活性剂，主要来源于一些细菌、真菌的次级代谢途径，其种类多样、结构复杂，但一般均由脂肪酸链和肽链以内酯或酰胺键结合成环而成。作为微生物的分子武器，自然环境中的脂肽往往具有抗病毒、拮抗细菌甚至拮抗真菌的天然功能，因此，被广泛应用于植物抗病虫害试剂开发。作为一类非离子型表面活性剂，脂肽的抑菌机理可能与常规抗真菌表面活性分子近似：非离子型生物表面活性剂结合并分离了目标真菌细胞膜上生存相关的必需蛋白质，导致目标真菌死亡。不同微生物产生的脂肽由于结构与性质上的差异，理论上应具有不同的抑菌谱，单一化合物往往不能做到广泛抑菌；且考虑到微生物的适应性进化，单一抗菌素的长期应用很有可能使得某些真菌产生抗药性。而若将结构更为多样、性质更为丰富的脂肽类物质联合使用，可能能够解决以上问题。因此，寻找能够产生更为丰富的脂肽类物质的微生物并提取、联合应用其脂肽类化合物，对于扩大脂肽类化合物抑菌谱、进一步减小目标真菌的抗生素适应性进化、甚至降低抑菌浓度方面具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌。

本发明的另一目的在于提供上述普洱茶树叶片内生芽孢杆菌的应用。

本发明的再一目的在于提供上述普洱茶树叶片内生芽孢杆菌制备的脂肽类物质及其应用。

为实现上述目的，本发明通过下述技术方案实现：

一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌，名称为贝莱斯芽孢杆菌FZ06(Bacillusvelezensis FZ06)，从西双版纳新鲜普洱茶树叶片中分离、纯化得到。

所述的普洱茶树叶片内生芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌FZ06(Bacillusvelezensis FZ06)，其保藏信息为：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2019年10月25日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2019854。

所述的普洱茶树叶片内生芽孢杆菌在制备脂肽类物质中的应用；优选包括如下步骤：

(1)发酵培养：将所述的普洱茶树叶片内生芽孢杆菌种子液接入发酵培养基中发酵培养，得到发酵液；

(2)酸沉淀分离、洗涤：将步骤(1)中得到的发酵液进行第一次离心去除菌体，得到的上清液添加酸调节pH至2.0，静置后进行第二次离心去除上清液，洗涤得到的沉淀，接着进行第三次离心，得到酸沉淀；

(3)酸沉淀萃取：将步骤(2)得到的酸沉淀加入溶剂中萃取，然后进行固液分离，得到的液体干燥，接着加水复溶，得到水相萃取液；

(4)脂肽类物质分离、纯化：将步骤(3)得到的水相萃取液进行第一次干燥，得到的干物加溶剂复溶，然后进行层析纯化，得到的含脂肽类物质的洗脱液进行第二次干燥，接着加水复溶，最后进行第三次干燥，得到脂肽类物质。

步骤(1)中所述的种子液优选通过如下步骤制备得到：将保存的普洱茶树叶片内生芽孢杆菌活化，扩大培养，得到种子液。