[发明专利]大网膜脱细胞基质材料的制备方法及软骨组织的构建方法

权利要求书

1.一种大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括步骤：

S100、对大网膜进行清洗；

S200、对清洗后的大网膜进行冻融循环处理得到第一中间物；

S300、将所述第一中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第一预定时长得到第二中间物；

S400、对所述第二中间物进行脱脂处理，然后清洗得到第三中间物；

S500、将所述第三中间物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值为7.8至8.2的溶液中，并持续第二预定时长得到第四中间物；

S600、对所述第四中间物进行脱组织细胞处理，然后清洗得到第五中间物；

S700、将所述第五中间物进行干燥和灭菌处理，得到所述大网膜脱细胞基质材料。

2.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S100中，采用生理盐水对所述大网膜进行清洗。

3.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S200中，将清洗后的大网膜加入到含有三羟甲基氨基甲烷和苯甲基磺酰氟且PH值为7.8至8.2的缓冲液中进行所述冻融循环。

4.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S300中，所述胰蛋白酶的质量百分比为0.1％至0.5％，所述苯甲基磺酰氟的质量百分比为0.1％至1％；

在所述步骤S500中，所述胰蛋白酶的质量百分比为0.1％至0.5％，所述苯甲基磺酰氟的质量百分比为0.1％至1％。

5.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S400中，采用异丙醇、正丁醇、乙腈、乙醇、甲醇中的一种或至少两种的混合物对所述第二中间物进行脱脂处理。

6.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S600中，采用含有镁盐、脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶以及脂肪酶的溶液对所述第四中间物进行脱组织细胞处理。

7.根据权利要求1所述的大网膜脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，在所述步骤S600中，首先采用磷酸缓冲盐溶液进行清洗，然后再采用乙醇进行清洗。

8.一种软骨组织的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括步骤：

S10、将用于软骨组织构建的种子细胞置于营养液中，并持续第三预定时长；

S20、从所述步骤S10得到的培养液中取细胞悬液，并接种于采用如权利要求1至7任一项所述的制备方法制备的大网膜脱细胞基质材料上；

S30、将接种后的大网膜脱细胞基质材料置于培养液中进行培养，并持续第四预定时长，得到构建的软骨组织。

9.根据权利要求8所述的软骨组织的构建方法，其特征在于，在所述步骤S10中，所述营养液为含有胎牛血清的DMEM/F12培养液。

10.根据权利要求8或9所述的软骨组织的构建方法，其特征在于，所述培养液的液面高于所述大网膜脱细胞基质材料的表面，且高度差小于1mm。