[发明专利]一株产褐藻胶裂解酶的产黑假交替单胞菌

说明书

本发明公开了一株产褐藻胶裂解酶的产黑假交替单胞菌，属于微生物技术领域。本发明的产黑假交替单胞菌已于2019年11月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019947。该菌株在25～37℃发酵1‑4％海带干重(荣成产)一天内可完全降解块状海带(0.5～1cm×0.5～1cm)，海带降解率达到70％；可产褐藻胶裂解酶，酶活达到54.5U/mL，比酶活达到545U/mg，该酶水解海藻酸钠可以制备聚合度为2‑4的褐藻寡糖，该菌株及酶基因在肥料、饲料、医药、食品等领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一株产褐藻胶裂解酶的产黑假交替单胞菌，属于微生物技术领域。

背景技术

海带是一种大型海藻，具有复杂的、多方面的生物活性，其活性成分有碘、甘露醇和海带多糖等。我国海带养殖已发展成大规模产业，产量约占世界海藻50％，居世界第一位。海带含有丰富的海带多糖，至今已发现有3种多糖：褐藻胶、岩藻多糖、褐藻淀粉。其中褐藻胶是海带中的主要成分，可达海带干重的21％-40％。但是褐藻胶是一种大分子多糖，具有很强的粘性、不易消化。

目前，生物法降解海带及其降解产物褐藻寡糖是国内外学者研究的热点。国外的Masaywki Wakabayashi筛选到一株Microbulbifer species 6532A菌，在30℃，180rpm的条件下发酵2天，可以将块状海带降解成碎片(参考文献：WAKABAYASHI M,SAKATOKU A,NODAF,et al.Isolation and characterization of Microbulbifer species6532Adegrading seaweed thalli to single cell detritus particles[J].Biodegradation,2012,23(1):93-105.)；浙江大学的张心齐 (专利号：CN 103540540A)筛选到一株Tamlana alginolityca菌，在28℃，菌株接种量10％，装液量200mL/250mL的条件下发酵4天，才能将底物为2％海带的降解；海南大学的柏超选育了两个人工菌群，HZ-3-A在30℃，菌株接种量3％，装液量100mL/250mL的条件下发酵 5天，才能基本降解海带(参考文献：柏超.海带降解复合菌的选育及其功能研究[D]；浙江大学,2012.)。

现有制约微生物降解海带制备褐藻寡糖的问题主要有：菌株生长缓慢，耐热性差，不适宜工业化生产；菌株所产褐藻胶裂解酶酶活较低，降解海带能力弱、最大海带降解浓度为2％、无法在较短的时间内降解海带；野生型菌株所产酶丰富，纯化褐藻胶裂解酶难度较大；菌株所产褐藻胶裂解酶比活低，即使进行异源表达提高蛋白的表达量，酶活还是偏低，不能大幅度提高降解海带能力。目前已报道的野生型假交替单胞菌所产的褐藻胶裂解酶的比酶活都在 300U/mg以下。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一株产黑假交替单胞菌，已于2019年11月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019947。

本发明的第二个目的是提供含上述产黑假交替单胞菌的微生物制剂。

在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂含有不少于10⁶CFU/mL的湿菌体或不少于10⁶CFU/g的干菌体。

本发明的第三个目的是提供所述产黑假交替单胞菌在降解海带中的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述降解海带是将产黑假交替单胞菌接种至海带液体培养基中，25～37℃，160～200rpm培养12～24h，海带完全降解，得到海带降解液。