[发明专利]一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒

说明书

本发明涉及体外诊断技术领域，公开了一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒。本发明提供了一种偶联血红蛋白抗体的乳胶微球以及包含其在内的糖化血红蛋白检测试剂盒，所述乳胶微球的加入能使得糖化血红蛋白抗体不会被吸附或连接在乳胶上，可以消除不同血液样本中血红蛋白含量在糖化血红蛋白检测中的影响，准确检测出贫血样本中糖化血红蛋白含量，而且孵育时间更短，稳定性好，便于长期保存使用。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之间的血糖浓度，可以反映患者近8～12周的血糖控制情况，其特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：(1)与血糖值相平行。血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平；(2)生成缓慢。由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降；(3)一旦生成就不易分解。糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平；(4)较少受血红蛋白水平的影响。因此，糖化血红蛋白是糖尿病诊断新标准和治疗监测的“金标准”现在糖尿病已成为继心脑血管疾病和肿瘤之后第三大非传染病，亦必然成为导致病残和死亡的重要原因之一，糖化血红蛋白可作为糖尿病患者长期血糖控制的指标而且与糖尿病慢性并发症的发生及发展有密切关系。

目前，临床上测定HbA1c的方法有很多，较常用的是HPLC法、酶法、乳胶免疫比浊法(透射法和散射法)等。其中，HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准方法被广泛采用，但成本较高；酶法检测的精密度、准确度较差；乳胶免疫比浊法因为能够用于全自动生化分析仪或者，通量高，且结果比酶法准确，价格相比HPLC方法低，能够进行大规模推广使用。

目前市售糖化血红蛋白测定试剂盒(乳胶增强比浊法)基本原理如下：糖化血红蛋白试剂R1中所用乳胶为物理吸附的空白乳胶，样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与乳胶有相同的非特异性吸附而固相化，正常情况下样本中血红蛋白含量相对于乳胶来讲是过量的。当加入含有两种抗体的R2试剂后，鼠抗人HbA1c的单克隆抗体特异性结合后形成乳胶-HbA1c-鼠抗人HbA1c单克隆抗体的复合物。此复合物由于羊抗鼠IgG抗体而形成凝集，凝集量与乳胶表面固相化的糖化血红蛋白量呈正相关。通过测定其散射光强度并与糖化血红蛋白百分浓度的校准曲线比较，可得出样本中糖化血红蛋白占血红蛋白的百分含量。

然而，在临床上，由于个体差异，大多数人血红蛋白含量不同，如贫血病人样本，其血红蛋白浓度过低，会影响试剂盒检测结果，临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。依据我国的标准：正常人(Hb含量在110-160g/L)，轻度贫血(Hb含量在90g/L-109g/L)，中度贫血(Hb含量在60-89g/L)、重度贫血(Hb含量在30-59g/L)。

当血红蛋白的量能够满足乳胶吸附量时(Hb浓度正常样本)，检测结果不受影响，但当血红蛋白量过低(贫血样本)等情况下，乳胶不能达到饱和吸附量，同时糖化血红蛋白抗体会被吸附在乳胶上，不利于抗原抗体的特异性反应，最终导致糖化血红蛋白抗体形成的免疫复合物减少，以致检测结果降低，有可能会误导医生做出错误的判断，延误病情。

美国罗氏公司Journal of Clinical Laboratory Analysis 26:481–485(2012)，开发一种糖化试剂盒(比浊抑制免疫法)能准确测定贫血样本，但试剂盒需要和专用仪器配套使用，测试成本高。