[发明专利]一种包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球及其制备方法和在生化检测中的应用

权利要求书

1.一种包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）制备量子点和酶的海藻酸钠黏稠溶液：将海藻酸钠和超纯水置于圆底烧瓶中搅拌10-20min，得到均匀的海藻酸钠黏稠溶液，在搅拌条件下，缓慢滴入量子点和酶的混合溶液，使其均匀分散，得到量子点和酶的海藻酸钠黏稠溶液；

2）制备包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球：将步骤1）制得的量子点和酶的海藻酸钠黏稠溶液缓慢滴入Ba²⁺溶液中，静置交联一段时间，得到包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球，过滤除去滤液，将凝胶微球置于4℃冰箱密封保存；

所包埋的量子点为水溶性量子点，所包埋的酶发生的酶促反应的产物是能使量子点猝灭的小分子；制备过程的温度控制在不影响酶活性的范围内。

2.根据权利要求1所述的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的缓慢滴入是指用滴管以3s/d的速度缓慢滴入量子点和酶的混合溶液；所述步骤2）的缓慢滴入是指将步骤1）制得的量子点和酶的海藻酸钠黏稠溶液用移液枪以60μL每滴的容量滴入Ba²⁺溶液中。

3.根据权利要求1所述的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的海藻酸钠黏稠溶液中海藻酸钠质量百分比为0.5—5.0%；步骤2）Ba²⁺溶液的浓度为0.080—0.100mol/L，交联时间为30-240min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球的制备方法，其特征在于，所述的酶为尿酸氧化酶、葡萄糖氧化酶、乳酸脱氢酶、胰蛋白激酶、丙氨酸转移酶和酪氨酸酶中的任一种；相应地，所述的小分子为过氧化氢、过氧化物、酪氨酸、ATP、NAD⁺、NADP⁺、NADH中的任一种。

5.权利要求1-3任一项所述的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球的制备方法制得的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球。

6.权利要求5所述的包埋量子点和酶的海藻酸钠凝胶微球在制备生化检测试剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的生化检测为人的生理参数的裸眼可视化检测，具体为将三粒凝胶微球分别加入100μL超纯水、标准溶液、未经处理或者仅稀释过的待测生物样本中，所述标准溶液的浓度为生理参数参考值上限所对应的浓度，分别编号1、2和3，反应一段时间后，对比三粒凝胶微球的荧光强度，若3号凝胶微球荧光强度与1号凝胶微球无明显区别，则说明待测生物样本所对应的生理参数偏低；若3号凝胶微球荧光强度处于1号凝胶微球与2号凝胶微球之间，则说明待测生物样本所对应的生理参数正常；若3号凝胶微球荧光强度与2号凝胶微球无明显区别，或者3号凝胶微球荧光强度低于2号凝胶微球，则说明待测生物样本所对应的生理参数偏高。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的生化检测为人的生理参数定量测定，具体为：

a. 绘制标准工作曲线：将已制备好的凝胶微球分别加入100μL不同浓度的待测标准物反应一段时间，随后在紫外光照射下，利用智能手机进行照片采集，并采用电脑软件ImageJ分析照片，读取凝胶微球灰度值；以标准物的浓度为横坐标、以反应前后凝胶微球灰度值的比值为纵坐标，绘制标准工作曲线，标准工作曲线的线性范围应与生理参数参考值范围一致或成比例变化；

b. 待测物生物样本定量分析：将已制备好的凝胶微球加入100μL待测生物样本反应一段时间，如步骤a的方式获得凝胶微球反应前后灰度值的比值，代入标准工作曲线，即可定量得出待测生物样本所对应的生理参数值；

或者，a步骤为标准加入法或对比分析法。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的生物样本为血清、尿液、唾液、汗液、组织液中的任一种。

10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的生理参数为尿酸值、葡萄糖值、乳酸值、丙酮酸值、3-羟基丁酸值中的任一种。