[发明专利]具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及引物组合物、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种有利于提高亲和力和活性的具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备用的引物组合物、制备方法和应用。本发明根据部分已有的能特异地结合HPG I的抗体序列，对其中部分氨基酸序列、特别是可变区的数个氨基酸序列进行修改、突变，从而得到上述结合蛋白。通过实验验证，上述结合蛋白能特异性的结合HPG I，其特异性强，灵敏度高，活性和亲和力均达到或高于当前市场产品，可用于科研或检测领域对HPG I的特异性检测。

技术领域

本发明涉及基因工程和生物检测领域，尤其是涉及一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备用的引物组合物、制备方法和应用。

背景技术

胃蛋白酶原(PG)是由细胞合成，并以不具有活性的酶原颗粒形式贮存在细胞内。当细胞内充满酶原颗粒时，其对新的酶原的产生具有负反馈作用。分泌进入胃腔内的胃蛋白酶原在胃酸的作用下，从分子中解离出一个小分子多肽，转变为具有生物活性的胃蛋白酶。已激活的胃蛋白酶对胃蛋白酶原也有激活作用。

根据胃蛋白酶原的生化性质和免疫原性可将其分成2个亚群，组分1～5的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I(PG I)，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II(PG II)，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生。

通常情况下，人体约有1％的胃蛋白酶原透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的胃蛋白酶原在血液中含量非常稳定。血清中PG I和PG II可以反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清中胃蛋白酶原的含量也随之改变。因此，监测血清中胃蛋白酶原的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。

血清中PG I是检测胃泌酸腺细胞功能的指标之一，胃酸分泌增多则PG I升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PG I降低；PG II与胃底粘膜病变的相关性较大，PG II升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PG I/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，测定PG I、PG II及其比值有重要的作用，PG I和PG II可作为胃炎、胃癌等多种胃部疾病的诊断标志物，相比胃钡餐造影、胃镜等传统检测手段，具有准确、无创、安全的优势。

目前临床上用于检测HPG I(人PG I)的方法有酶联免疫吸附法、化学发光法、流式荧光发光法、时间分辨荧光免疫分析法、光激化学发光免疫分析法、胶体金等，不同方法都有各自的优缺点，但是都需要针对于HPG I的特异性单克隆抗体。市面上对特异性好、灵敏度高的，高活性和高亲和力的抗体存在强烈的需求，目前国内用于检测HPG I的单克隆抗体大都自外国采购，可选择的不多，因此本发明提供的单克隆抗体为HPG I的特异性检测提供了更优的选择。。

发明内容

基于此，有必要提供一种高活性和高亲和力的具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备用的引物组合物、制备方法和应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下。

一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其抗原结合结构域包括下述至少一个互补决定区，或者其抗原结合结构域与下述至少一个互补决定区具有至少80％的序列同一性且与HPG I具有K_D≤5.14E-09mol/L的亲和力：

互补决定区CDR-VH1是G-X1-T-F-X2-S-Y-T-X3-H，其中：X1是Y或F，X2是L或I，X3是I或L；

互补决定区CDR-VH2是F-X1-P-I-S-X2-Y-T-N-X3-N-Q-E-F-X4-D，其中：X1是N或Q，X2是D或E，X3是T或S，X4是K或R；

互补决定区CDR-VH3是R-X1-W-H-X2-M-X3-Y，其中：X1是R或K，X2是A或G，X3是E或D；