[发明专利]一株特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26及其所产的透明质酸酶HylC和应用

说明书

本发明提供了一株特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26及其所产的透明质酸酶HylC和应用。所述柠檬酸杆菌T26的分类命名为柠檬酸杆菌T26 Citrobacter sp.T26，保藏编号为CCTCC NO：M 2017203，菌落为圆形，半透明，乳白色，表面光滑且湿润，中心隆起，边缘整齐，直径为1.5 mm~3mm。所述透明质酸酶HylC是由柠檬酸杆菌T26发酵得到的，该酶能够专一性降解透明质酸，其降解方式为内切型，最终产物为不饱和透明质酸二糖。所述透明质酸酶HylC能用来制备重组透明质酸酶，还能够促进皮下扩散，作为药物扩散剂来促进药物的扩散和吸收功效。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一株特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26及其所产的透明质酸酶HylC和应用。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是糖胺聚糖的一种，是由D-葡萄糖醛酸(GlcA)和N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)双糖重复单元通过β-1，3糖苷键和β-1，4糖苷键连接而成的线性高分子酸性粘多糖，其在食品、医药和化妆品等领域已有广泛的应用。目前，透明质酸主要是靠从微生物发酵中获得，少量从动物组织中提取。发酵法和提取法获得的透明质酸分子量较大，分子量低于100kDa的透明质酸，尤其是透明质酸寡糖，一般是通过透明质酸酶降解法来制备的，这种低分子透明质酸因为其具有抗肿瘤、促进血管生成和伤口愈合、调节炎症等医学应用价值，而引起了人们的广泛关注。

透明质酸酶是一类能够降解透明质酸的酶的总称，微生物来源的透明质酸酶通过β-消去反应降解透明质酸，在非还原末端产生不饱和双键。透明质酸酶不仅能够作为工具酶生产低分子透明质酸，而且其本身在医药领域也具有重要的生物学活性，临床上它可以作为一种重要的药物扩散促进剂，用于促进药物的吸收、促进手术及创伤后局部水肿或血肿的消散。动物来源的透明质酸酶资源有限、含量低、成本高、而且存在病毒感染的风险，而微生物来源的透明质酸酶因其来源广、发酵工艺简单、成本低、纯度高、环境污染少等优点受到更多的青睐。目前市面上已经商品化的透明质酸酶非常少，而且存在生产成本高、价格昂贵、底物专一性差等缺点，因此筛选具有工业化应用潜力的新酶十分必要，并且筛选能够生产优质的透明质酸酶的菌株也十分重要。

发明内容

本发明提供了一株特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26及其所产的透明质酸酶HylC和应用，所述的柠檬酸杆菌T26可以生产透明质酸酶，该酶能够增加专一性降解透明质酸的透明质酸酶的数量和种类，还能够促进透明质酸酶的应用价值。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一株特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26，其特征在于，其分类命名为柠檬酸杆菌Citrobacter sp.，保藏编号为CCTCC NO：M 2017203。

进一步的，所述柠檬酸杆菌T26的菌落为圆形，半透明，乳白色，表面光滑且湿润，中心隆起，边缘整齐，直径为1.5mm～3mm。

进一步的，所述柠檬酸杆菌T26的适合生长温度为25-35℃，pH 5～10。

进一步的，所述柠檬酸杆菌T26生长迅速，培养3～12h达到生长对数期。

本发明还提供了一种透明质酸酶HylC，它是由所述的特异性降解透明质酸的柠檬酸杆菌T26发酵得到，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

进一步的，所述透明质酸酶HylC的适合反应温度为30～50℃，适合反应pH为4.5～6.5，Ca²⁺、Mn²⁺、Ba²⁺促进所述透明质酸酶HylC的酶活。

进一步的，0.08～0.8M的NaCl盐浓度对所述透明质酸酶HylC的酶活具有促进作用。