[发明专利]一种有限代数的滋养细胞的制备方法和SNK细胞的培养方法

权利要求书

1.一种SNK细胞的培养方法，其特征在于，将有限代数的滋养细胞与外周血单核细胞混合后培养14~28d，得到SNK细胞；

所述有限代数的滋养细胞与外周血单核细胞的数量比为1~500:1~10；

所述培养的温度为35~42℃，所述培养的CO₂体积浓度为5%；

所述有限代数的滋养细胞的制备方法，包括以下步骤：

1）将TAX2基因连接到慢病毒表达载体上，转入感受态细胞，得到含有TAX2基因的慢病毒；

2）将所述步骤1）得到的含有TAX2基因的慢病毒感染外周血单核细胞后培养，收集CD3-细胞；

3）将41BBL-MICA融合基因连接到慢病毒表达载体上，转入感受态细胞，得到含有41BBL-MICA融合基因的慢病毒；

4）将所述步骤2）得到的CD3-细胞与步骤3）得到的含有41BBL-MICA融合基因的慢病毒混合后进行培养，得到有限代数的滋养细胞；

所述步骤1）和3）之间没有时间顺序限定；

所述步骤1）TAX2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述步骤3）41BBL-MICA融合基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述步骤1）和3）慢病毒表达载体独立的包括pCDH载体；

所述步骤1）和3）感受态细胞独立的包括大肠杆菌感受态细胞；

所述步骤2）和4）培养的时间独立的在14 d以上；

所述步骤2）和4）培养使用的培养基独立的以1640培养基为基础培养基，包括质量百分含量为8~12%的胎牛血清和浓度为180~220IU/mL的IL-2；

所述SNK细胞杀伤肺癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞和肝癌细胞；

所述SNK细胞与靶细胞的效靶比例为16:1。