[发明专利]一种有效转染DNA的纳米载体及其制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种有效转染DNA的纳米载体及其制备方法及其应用，该纳米粒子向NH₄H₂PO₄和PEI混合溶液中加入Hypericin和D‑luciferin，再加入CaCl₂溶液进行反应；反应完成后，离心弃去上清液，获得有效转染DNA的纳米载体。本发明所制得的Hypericin&D‑luciferin@CaP‑PEI纳米载体具有很好的转染DNA进入肿瘤细胞中的能力，进入肿瘤细胞中后，无需外加光源，发挥PDT活性。本发明的制备方法简单方便，原料来源广，生物利用度高，可以大规模生产应用于光敏肿瘤治疗中。

技术领域

本发明属于具有光动力活性的纳米载药领域，具体涉及一种有效转染DNA的纳米载体及其制备方法和在光敏肿瘤治疗中的应用。

背景技术

光动力疗法(Photodynamic therapy，简称PDT)是一种新型的肿瘤治疗方法。以特定波长的光激发富集于肿瘤部位的光敏剂，光敏剂与周围的氧气反应产生活性氧，通过氧化损伤肿瘤细胞内的生物大分子，达到抑制肿瘤的效果。光敏剂、光源及氧气是PDT的三个关键要素。传统的PDT主要依靠外源性激发光源，对应光源组织穿透深度浅，大多只能用于浅表病灶治疗。因此，寻求有效方法解决光源穿透深度的问题对实现PDT体内肿瘤治疗具有重大意义。

生物自发光是一种特殊的化学发光，能使化学能转变为光能的效率达到100％。其发光机制是在一定的条件下，特定的酶催化底物发生氧化释放光子，进而敏化光敏剂产生活性氧，杀死肿瘤细胞，用于治疗深层病变。

近年来，许多不同的载体已经被研究用于转染，包括树突状大分子、多肽、多糖、阳离子聚合物、脂质体和无机载体。在被研究的无机纳米载体中，纳米磷酸钙(CaP)是目前应用和研究最为广泛的生物材料。CaP具有良好的生物相容性，且其结构的稳定性依赖于环境的pH值。此外，由于转染载体的选择对转染结果影响较大，现有的基因转染载体，如阳离子聚合物、脂质类等，尽管其具有适用性较广，转染效率高，重复性好等优点，但是仍存在着对细胞毒性较大的致命缺点。因此，寻求高效转染而损伤轻微的转染载体对体内的应用具有重要意义。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种利用Hypericin&D-luciferin@CaP-PEI纳米载体，该纳米载药颗粒可明显提高DNA转染到肿瘤细胞中的效率，通过生物发光共振能量转移，实现生物内源性发光，从而达到PDT的高效治疗。

本发明还提供该Hypericin&D-luciferin@CaP-PEI纳米载体的制备方法及其在制备光敏药物中的应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种有效转染DNA的纳米载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

向NH₄H₂PO₄和PEI混合溶液中加入Hypericin和D-luciferin，再加入CaCl₂溶液进行反应；反应完成后，离心弃去上清液，获得有效转染DNA的纳米载体。

其中，所述NH₄H₂PO₄和PEI混合溶液的pH值调至7.1-7.4。

作为优选，所述向NH₄H₂PO₄和PEI混合溶液中加入Hypericin和D-luciferin，再加入CaCl₂溶液进行反应为在搅拌条件下，搅拌速率为450-500r/min。

进一步地，所述搅拌速率为450r/min。