[发明专利]一种测定促卵泡激素的方法

说明书

本发明涉及生物检测方法的技术领域，具体涉及一种测定促卵泡激素的方法，包括以下步骤：(1)制作微流控芯片；(2)将水凝胶与捕获抗体混合后固化在微流控芯片内；(3)加入检测样本并孵育,使检测样本中的FSH与捕获抗体结合；(4)加入被染色的检测抗体并孵育，使染色后的检测抗体与FSH‑抗体结合物结合发出荧光；(5)对检测后的水凝胶进行拍照，并分析拍摄的图片的荧光强度，计算检测样品中促卵泡激素的含量。本发明的测定促卵泡激素的方法，通过微流控技术与ELISA的结合，产生了新型检测方式，所需样品量少，实现了对于检测样品中FSH含量的一步、快速定量检测。

技术领域

本发明涉及生物检测方法的技术领域，具体涉及一种测定促卵泡激素的方法。

背景技术

促卵泡激素(FSH)是由脑垂体前叶释放的促性腺激素。它通过刺激生殖细胞成熟和刺激卵泡生长，在女性生殖发育和体内平衡中起着关键作用。血液或血清中FSH浓度是下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)功能优劣的重要指标，其适用于哺乳动物青春期和发情期的阶段，以及人类月经周期的阶段。在每个发情期，循环血液中FSH的浓度会在很短的时间内发生剧烈的变化。对于此类事件中FSH浓度的快速监测，非常需要一种快速、可靠、灵敏且样品消耗量小的现场测量方法。

目前，血/血清中FSH(FSH)的浓度最常用放射免疫分析法(RIA)进行定量。RIA中使用的抗体是为竞争性免疫测定设计的，因此具有良好的特异性。这种方法被认为是定量血清中FSH浓度的金标准。然而,RIA测定FSH浓度也有一些不足：如灵敏度相对较低,大型测量的不确定性,较小的校测范围(2-60ng/mL),单个样品需要60μL的量。更重要的是，整个实验需要几天的时间来完成。在测量过程中，静脉血清需要被高倍稀释。这个操作可能会导致一些样本超出其测量范围。酶联免疫吸附试验(ELISA)，特别是夹心ELISA，为FSH的定量分析提供了一种新的方法。夹心ELISA由于使用了抗体对，对靶抗原的特异性较高。这项技术确实提高了FSH检测的效率(从2天到5小时)。然而，目前仍没有可靠的商用ELISA试剂盒可用于FSH检测(大多数商用试剂盒无法产生与金标准RIA方法相媲美的结果)。ELISA使用传统的96孔板患有其他技术的缺点,比如大样本/试剂消耗(100μL)和试验时间相对较长(5小时)。此外，目前ELISA检测所需的抗体仅在硅、玻璃或聚合物基材上的表面。对于低浓度的FSH检测，仅表面结合不能产生检测所需的信号。同时，ELISA检测需要专门的光谱仪来进行吸光度测量，该仪器价格较为昂贵，带来较大的检测成本。研究新的快速且灵敏的FSH检测方式迫在眉睫。

水凝胶是一种生物相容性高且可降解的新型材料，能够形成三维交联。在免疫测定中，它有助于抗原抗体在三维生物相容性基质中结合，增加测定的敏感性。微流控技术可以将复杂的化学反应及物理变化过程集成在一个小芯片上，形成“芯片实验室”，其具有体积小、成本低、试剂消耗量少等优点，已经在生化检测等方面展现出优异的性能，具有广泛的应用前景。同时，由于其便捷性，图像分析技术被广泛应用于科学研究中。

Image-Pro Plus是顶级的图像分析软件包，它适合于荧光成像、质量控制、材料成像及其它的多项科研、医学与工业应用。因此，它也可应用于结合微流控技术的FSH检测中。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定促卵泡激素的方法，通过微流控技术与ELISA的结合，产生了新型检测方式，所需样品量少，实现了对于检测样品中FSH含量的一步、快速定量检测。

本发明实现目的所采用的方案是：一种测定促卵泡激素的方法，包括以下步骤：

(1)制作微流控芯片；

(2)将水凝胶与捕获抗体混合后固化在微流控芯片内；

(3)加入检测样本并孵育,使检测样本中的FSH与捕获抗体结合；

(4)加入被染色的检测抗体并孵育，使染色后的检测抗体与FSH-抗体结合物结合发出荧光；