[发明专利]离体组织保存液及其保存方法和应用

说明书

本发明公开了一种离体组织保存液及其保存方法和应用。该离体组织保存液包括：青链霉素双抗、胎牛血清和改进型L‑15培养基。所得离体组织保存液能为肿瘤组织提供营养并具有抗菌的作用，能够提高了肿瘤组织的活性，进而提高了临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率，此外，还能够保存肿瘤组织样本，建立样本数据库，便于再次实验需要，减少反复取材。

技术领域

本发明涉及生物学试剂技术领域，特别是关于一种离体组织保存液及其保存方法和应用。

背景技术

组织接种、组织冻存与复苏在医疗、生物、优生学等多个领域已广泛应用，但对于一些难以获得的组织，因实验工作的原因还需要重复实验，反复培养，或直接用组织块接种到动物体内。

目前，普通的保存液对于离体组织的活性保存还有待提高，会导致组织活性不高、建模成功率低以及样本冻存失败。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种离体组织保存液，其能够提高组织的活性，进而提高了临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率。

为实现上述目的，本发明提供了一种离体组织保存液，包括：青链霉素双抗、胎牛血清和改进型L-15培养基；

所述改进型L-15培养基以L-15培养基为基础，加入低聚半乳糖、SOD、维生素E、谷胱甘肽、氢化可的松、IL-2和PBS缓冲液，各个组分的含量为：8％胎牛血清、310～330mg/LL-谷氨酰胺、750～850mg/L半乳糖、30～50mg/L低聚半乳糖、300-500U/ml SOD、35～50μg/L维生素E、330～450mg/L丙酮酸钠、50～120mg/L谷胱甘肽、0.8～1.2μg/L氢化可的松、500-800U/ml IL-2和10mM PBS缓冲液。

本发明的一个优选的实施方式中，上述青链霉素双抗、胎牛血清和改进型L-15培养基的体积比是1∶15-50∶30-100。

更优地一个实施方式中，上述青链霉素双抗、胎牛血清和改进型L-15培养基的体积比是1∶30∶69。

本发明的一个优选的实施方式中，上述青链霉素双抗在离体组织保存液中最终的浓度为0.5-3％，优选的，最终的浓度为1％或2％。

本发明的一个优选的实施方式中，上述胎牛血清在离体组织保存液中最终的浓度为15-50％，优选的，最终的浓度为30％。

本发明的另一目的在于提供一种上述离体组织保存液用在保存肿瘤组织的应用。

本发明的一个优选的实施方式中，上述肿瘤组织是胃肠道肿瘤组织。

本发明的另一目的在于提供一种肿瘤组织的保存方法，步骤包括：将离体的肿瘤组织置于上述离体组织保存液中降温保存。

本发明的一个优选的实施方式中，上述离体组织保存液和肿瘤组织的体积比是5∶4。

与现有技术相比，根据本发明具有如下有益效果：

现有单纯的L-15培养基，培养过程中没有缓冲剂，而且需要避免和二氧化碳，在培养过程中产生的过氧化物、超氧化物及毒素都无法有效的清除，不利于离体组织的培养和保存。而且，L-15培养基中蛋白含量极低，对于肿瘤组织的营养需求不够。本发明所述离体组织保存液中加入了较高比例的胎牛血清，其能为肿瘤组织提供营养，加入青链霉素双抗，起到抗菌的作用。

本发明所述的离体组织保存液能够提高肿瘤组织的活性，成瘤率达到42.86％，进而提高了临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率；另外，该离体组织保存液能够保存肿瘤组织样本，建立样本数据库，便于再次实验需要，减少反复取材。