[发明专利]一种鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.供试品溶液的制备：称取鸡骨草，粉碎，精密称定，加入乙醇溶液，加热回流，滤过，合并滤液，减压浓缩至无醇味，加乙酸，摇匀后缓缓加至已处理干净的聚酰胺柱上，洗脱，至洗脱液滴加氨水不变色为止，弃去，加氨水溶液洗脱至无色，收集氨水洗脱液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解定容，取适量经微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液；

S2.对照品溶液的制备：称取鸡骨草丙素、鸡骨草乙素、鸡骨草甲素、N-反式对香豆酰酪氨酸适量，精密称定，乙醇溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液；

S3.测定：精密吸取供试品溶液和对照品溶液，采用液相色谱法测定，得到指纹图谱，以鸡骨草甲素对照品的色谱峰保留时间和峰面积为1，进行相对保留时间和相对峰面积的计算以及相似度评价；

所述的液相色谱法测定的流动相A为体积比为325:75的甲醇-乙腈混合液，流动相B为0.05％～0.2％甲酸水溶液；

所述液相色谱法测定的梯度洗脱程序为：从0-10min，流动相A的体积百分含量由20％提高至26％，流动相B的体积百分含量由80％降低至74％；从10-20min，流动相A的体积百分含量由26％提高至28％，流动相B的体积百分含量由74％降低至72％；从20-30min，流动相A的体积百分含量由28％提高至30％，流动相B的体积百分含量由72％降低至70％；从30-45min，流动相A的体积百分含量由30％提高至32％，流动相B的体积百分含量由70％降低至68％；从35-40min，流动相A的体积百分含量由32％提高至35％，流动相B的体积百分含量由68％降低至65％。

2.根据权利要求1所述的鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中的供试品溶液的制备方法为称取鸡骨草，粉碎，取1～5g，精密称定，加入10～50倍30％～70％乙醇溶液，加热回流2～5次，滤过，合并滤液，减压浓缩至无醇味，加1～4滴乙酸，摇匀后缓缓加至已处理干净的聚酰胺柱上，分别用0.05％～0.2％乙酸水和0.05％～0.2％乙酸的10～30％乙醇洗脱，至洗脱液滴加氨水不变色为止，弃去，加pH10的氨水溶液洗脱至无色，收集氨水洗脱液，减压浓缩至干，残渣加30％～70％乙醇溶解定容，取适量经微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中的对照品溶液的制备方法为称取鸡骨草丙素、鸡骨草乙素、鸡骨草甲素、N-反式对香豆酰酪氨酸适量，精密称定，用30％～70％乙醇溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液。

4.根据权利要求1中所述的鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的液相色谱法所采用的液相色谱仪为超高效液相色谱仪和高效液相色谱仪中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的液相色谱法所采用的液相色谱仪为超高效液相色谱仪，所述超高效液相色谱仪的色谱柱规格为2.1mm×100mm、1.8μm，流速为0.3mL/min，进样量为0.3μL，柱温为25℃。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的液相色谱指纹图谱有20个共有特征峰，其中，第11号峰为鸡骨草丙素峰，第12号峰为N-反式对香豆酰酪氨酸峰，第15号峰为鸡骨草乙素峰，第20号峰为鸡骨草甲素峰，记第20号峰为参照峰。

7.权利要求1～5中任一项所述的构建方法在对鸡骨草药材和酰胺类提取物及其相关制剂产品的鉴别、质量评价和质量控制、质量检测中的应用。