[发明专利]一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基

说明书

本发明提供了一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基，本发明提供的培养基不含血清、不含动物来源的组分，本发明所提供的克隆培养基，能够使CHO细胞的克隆成团更紧密、扩散少，并且克隆的生长速度快，能够更高效地挑选出适合生产使用目的的表达克隆。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基。

背景技术

现有生物制品的生产，根据其生产目的、成本控制等多种因素，选择不同种类的生物制品的生产表达系统。常用的生产表达生物制品的表达系统有大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。

大肠杆菌表达系统特点在于遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达的产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强、及适用范围广。

酵母表达系统的特点是酵母是一种单细胞低等真核生物，具有翻译后修饰功能，且酵母的培养条件简单，生长繁殖迅速，能够耐受较高的流体静压，用于生物制品表达，可以大规模生产，有效降低成本。

昆虫表达系统也属于真核表达系统，昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒，将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。其表达的蛋白可以有正确的折叠、二硫键的搭配，具有蛋白翻译后的加工修饰，也可以容纳大分子的插入片段，能够同时表达多个基因，但是缺点是外源蛋白表达处于极晚期病毒启动子的调控下。

哺乳动物细胞表达系统在蛋白的起始信号、加工、分泌、糖基化方面具有独特优势，适合表达完整的大分子蛋白，由哺乳动物细胞翻译后再加工修饰产生的外源蛋白质，在活性方面远远胜过其他表达系统，更接近于天然蛋白质。

哺乳动物细胞表达系统中，中国仓鼠卵巢细胞（CHO，Chinese hamster ovarycells）表达系统是目前较为广泛的生物制品表达系统。CHO表达系统具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白质在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长，也可以悬浮生长，且具有较高的耐受剪切力和渗透压的能力；具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白的整合稳定；具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白，便于下游产物分离纯化；并且能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养。

使用中国仓鼠卵巢细胞表达系统，其表达生物制品的步骤包括：外源基因的合成，表达载体构建，将外源基因导入适合CHO宿主细胞表达的载体；转染，将含有目的基因的载体转染至CHO宿主细胞中；基因扩增；筛选出符合条件的克隆；克隆培养；目标蛋白的表达、分离纯化。

在CHO细胞表达系统中，克隆的筛选是非常重要的一个环节，根据细胞筛选目的的不同，可以分为基于目标蛋白产量的筛选和基于生理生化特征的筛选。在克隆筛选过程中，克隆的形成率、克隆形成的状态、克隆的生长速度、及克隆成团的状态等，都会影响克隆的筛选结果，如何更有效、快速地选取符合生产目的的克隆，是生物制品生产表达的一个至关重要的环节。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基，本发明提供的培养基不含血清、不含动物来源的组分，该培养基与现有CHO细胞克隆培养基相比，其克隆形成率较高，使用本发明所提供的克隆培养基，能够使CHO细胞的克隆成团更紧密、扩散少，并且克隆的生长速度快，能够更高效地挑选出适合生产使用目的的表达克隆。

本发明提供的培养基为CHOM-C2系列，该系列培养基是在本公司上海迈泰君奥生物技术有限公司产品CHOM-B09的基础上进一步改进而得。CHOM-B09是一种无血清、无动物源组分的培养基，其中不含有L-谷氨酰胺，用于CHO细胞的克隆形成及生长。