[发明专利]基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2；反应缓冲液R1包括缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂；胶乳试剂R2包括至少两种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中的相应LN单抗标记的胶乳微球；其中，每种组成液之间的混合比例为1:1。本发明还提供了一种上述试剂盒的制备使用方法。本发明可在全自动生化分析仪上使用，相比其他方法，不仅操作简单、检测速度快，而且选择性好、特异性佳、精密度高、重复性与一致性好。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

层粘连蛋白(laminin,LN)，主要存在于基膜(basal lamina)结构中，是基膜所特有的非胶原糖蛋白，其相对分子质量为820kDa，含13-15％的糖，有三个亚单位，即一条重链(α链，400kDa)和β1(215kDa)、β2(205kDa)两条轻链。层粘连蛋白在结构上呈现不对称的十字形，由一条长臂和三条相似的短臂构成，这四条臂均有棒状节段和球状的末端域。β1和β2链的短臂上有两个球形结构域，α链的短臂上有三个球形结构域，其中，有一个结构域同Ⅳ型胶原结合，一个结构域同肝素结合，还有一个结构域同细胞表面受体结合。正是这些独立的结合位点使LN作为一个桥梁分子，介导细胞同基膜结合。

层粘连蛋白(LN)是观察慢性肝炎患者肝组织纤维化程度的一项重要指标。肝纤维化是多种慢性肝病的终末发展阶段，在消化内科中较为常见，对患者身体能产生较大影响，常见病因有酒精肝、慢性乙型肝炎、脂肪肝等。由于脂肪肝和酒精肝的发病率在我国呈上升趋势，同时我国慢性乙型肝炎患者基数较大，故肝纤维化的发病率也一直居高不下。肝纤维化若未及时处理及治疗，则最终可发展为肝硬化，故对肝纤维化的早期诊断和早期治疗具有重大的临床意义。

目前，临床上常用Ⅲ型胶原、透明质酸、层粘连蛋白、IV型胶原等作为检测肝纤维化程度的指标。其中，层粘连蛋白是细胞基底膜中特殊的非胶原性结构蛋白，和肝纤维化程度及门静脉的压力有较大联系。

关于层粘连蛋白的检测方法，目前市场上主要是化学发光法。化学发光法是一种灵敏简便的方法，但其选择性差，会对一个系列的化合物做出反应，而不是针对单个的某一化合物。因此，目前急需一种选择性好、特异性佳、精密度高的层粘连蛋白的检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种选择性好、特异性佳、精密度高的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒及其制备使用方法。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，包括包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2；

所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为：缓冲液3-10g/L，无机盐5-15g/L，增浊剂10-30g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂3-14g/L，表面活性剂0.5-2.5mL/L，溶剂为纯化水；

所述胶乳试剂R2包括至少两种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.5-1.0mg/mL的相应LN单抗标记的胶乳微球；所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为：缓冲液2-10g/L，无机盐5-15g/L，稳定剂20-46g/L，防腐剂0.2-0.8mL/L，表面活性剂1-7mL/L，溶剂为纯化水；其中，在所述胶乳试剂R2中，每种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。

作为本发明的优选方式之一，在所述反应缓冲液R1中：

所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；