[发明专利]一种多重AAV病毒滴度的检测方法

权利要求书

1.一种多重AAV病毒滴度的检测方法，所述多重AAV病毒包括第一腺相关病毒和第二腺相关病毒；

所述第一腺相关病毒包括位于两个ITR序列之间的第一基因表达框，所述第一基因表达框按5’至3’方向依次包括转录起始元件、第一目的基因片段、第一剪接供体信号片段、第一滴度校准片段，所述第一目的基因片段为目的基因5’端片段；

所述第二腺相关病毒包括位于两个ITR序列之间的第二基因表达框，所述第二基因表达框按5’至3’方向依次包括第二滴度校准片段、第一剪接受体信号片段、第二目的基因片段；

所述第一滴度校准片段和第二滴度校准片段的多核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示；

所述检测方法包括：

提供第一腺相关病毒的滴度；

基于第一滴度校准片段和第二滴度校准片段，获取第一腺相关病毒和第二腺相关病毒的检测信号强度，根据两者的检测信号强度的比值，基于第一腺相关病毒的滴度获取第二腺相关病毒的滴度。

2.如权利要求1所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，基于转录起始元件提供第一腺相关病毒的滴度。

3.如权利要求1所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，通过特异性针对转录起始元件的引物，获取第一腺相关病毒的滴度。

4.如权利要求1所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，通过特异性针对滴度校准片段的引物，获取腺相关病毒的检测信号强度。

5.如权利要求1所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，所述多重AAV病毒包括第一腺相关病毒至第N腺相关病毒，其中，N为不小于3的正整数，第二腺相关病毒至第N-1腺相关病毒，均包括位于两个ITR序列之间的第n基因表达框，所述第n基因表达框按5’至3’方向包括第2n-2滴度校准片段、第n-1剪接受体信号片段、第n目的基因片段、第n剪接供体信号片段、第2n-1滴度校准片段，所述第N腺相关病毒包括位于两个ITR序列之间的第N基因表达框，所述第N基因表达框按5’至3’方向包括第2N-2滴度校准片段、第N-1剪接受体信号片段、目的基因3’端片段、转录终止元件，其中，n为不大于N-1的正整数，且n不为1。

6.如权利要求5所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：基于第2n-2滴度校准片段和其前一顺位的滴度校准片段，获取第n腺相关病毒和其前一顺位的腺相关病毒的检测信号强度，根据两者的检测信号强度的比值，基于其前一顺位的腺相关病毒的滴度获取第n腺相关病毒的滴度。

7.如权利要求5所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：基于第2N-2滴度校准片段和其前一顺位的滴度校准片段，获取第N腺相关病毒和其前一顺位的腺相关病毒的检测信号强度，根据两者的检测信号强度的比值，基于其前一顺位的腺相关病毒的滴度获取第N腺相关病毒的滴度。

8.如权利要求5所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，所述第n基因表达框按5’至3’方向依次包括第2n-2滴度校准片段、第n-1剪接受体信号片段、第n目的基因片段、第n剪接供体信号片段、第2n-1滴度校准片段；

和/或，第2n-2滴度校准片段与前一顺位的滴度校准片段相配合；

和/或，所述第N基因表达框按5’至3’方向依次包括第2N-2滴度校准片段、第N-1剪接受体信号片段、目的基因3’端片段、转录终止元件；

和/或，第2N-2滴度校准片段与前一顺位的滴度校准片段相配合。

9.如权利要求1所述的多重AAV病毒滴度的检测方法，其特征在于，所述多重AAV病毒为双重AAV病毒，所述第二基因表达框还包括转录终止元件，第二目的基因片段为目的基因3’端片段。