[发明专利]石墨相氮化碳量子点复合物及其合成方法和生物应用

权利要求书

1. 一种石墨相氮化碳量子点复合物，其特征在于，是由硫氧共掺杂石墨相氮化碳量子点S,O-CNQDs吸附在二氧化锰纳米片层上获得，所述的S,O-CNQDs平均粒径为1～5nm ；包括以下步骤：

步骤一：称取乙二胺四乙酸二钠和硫脲按质量比1:2.45置于研钵中研磨均匀，将获得的粉末转移到坩埚中，放入烘箱中200 ℃反应2 h反应；

步骤二：步骤一反应后的产物经无水乙醇洗涤后溶于超纯水中，得到溶液；

步骤三：将步骤二获得的溶液离心取上清液，过滤，透析，得到纯化的S,O-CNQDs溶液；

步骤四：将纯化的500 μL浓度为3mg/mL的S,O-CNQDs溶液滴加到2-(N-吗啉)乙磺酸（MES）缓冲溶液的离心管中；

步骤五：将1 mL浓度为15 mM的高锰酸钾溶液滴加到上述离心管中，用超纯水定容获得反应混合液；

步骤六：将步骤五获得的反应混合液超声直至形成棕色胶体溶液，然后经过离心，洗涤，冷冻干燥后得到固体粉末即为二氧化锰-硫氧共掺杂的石墨相氮化碳量子点复合物（MnO₂-S,O-CNQDs）。

2.根据权利要求1所述的石墨相氮化碳量子点复合物，其特征在于：步骤六中，所述的超声时间为5-50分钟。

3.权利要求1所述的石墨相氮化碳量子点复合物在检测谷胱甘肽含量和细胞成像中的应用。

4.一种检测谷胱甘肽的含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将权利要求1获得的石墨相氮化碳量子点复合物用作检测液，并将其和一定浓度梯度的谷胱甘肽标准溶液混合，测定加入GSH前检测液的荧光强度F₀以及不同GSH浓度下检测体系的荧光强度F，计算相对荧光强度F/F₀，然后以GSH标准溶液的浓度为横坐标，相对荧光强度F/F₀为纵坐标,确定标准液中谷胱甘肽浓度和相对荧光恢复强度的关系；

步骤二：将检测液和未知浓度的谷胱甘肽待测样品混合，记录荧光强度；

步骤三：计算待测样品中谷胱甘肽的含量，检测谷胱甘肽的范围为10-270 μM。

5.一种细胞成像方法，其特征在于，采用权利要求1所述的石墨相氮化碳量子点复合物，包括如下步骤：

步骤一：采用MTT法测定所述的石墨相氮化碳量子点复合物的细胞毒性；HepG2细胞接种于96孔板中，置于孵箱中孵育，分别以不同浓度的石墨相氮化碳量子点复合物孵育细胞；

步骤二：PBS洗涤后，每孔加入MTT孵育细胞；

步骤三：加二甲亚砜(DMSO)溶解每孔形成的甲瓒晶体；

步骤四：摇匀后，用酶标仪测定吸光度；

步骤五：细胞成像；HepG2细胞接种于激光共聚焦培养皿中置于孵箱中孵育；

步骤六：用N-乙基马来酰亚胺（NEM）预处理清除细胞内的GSH，之后以石墨相氮化碳量子点复合物孵育细胞作为对照，然后用PBS洗涤；

步骤七：以步骤六中石墨相氮化碳量子点复合物的浓度孵育细胞作为实验组，然后用PBS洗涤；

步骤八：细胞用多聚甲醛固定，最后，在激光共聚焦扫描显微镜下记录荧光图像。