[发明专利]带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法在审
申请号: | 201911411879.8 | 申请日: | 2019-12-31 |
公开(公告)号: | CN111116757A | 公开(公告)日: | 2020-05-08 |
发明(设计)人: | 郭玉堃;常雯茹;王梦珂;张爽;郭豫杰;杨国宇 | 申请(专利权)人: | 河南农业大学 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/66;C12N15/70;C12N1/21;A61K47/42;C12R1/19 |
代理公司: | 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 | 代理人: | 张立强 |
地址: | 450002 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 带有 半乳糖 结合 凝集素 ew29 标签 铁蛋白 融合 蛋白 纳米 颗粒 及其 制备 方法 | ||
1.带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白,其特征在于,包括EW29标签、TEV蛋白酶识别位点和铁蛋白片段,所述TEV蛋白酶识别位点位于EW29标签的C端,所述铁蛋白片段位于TEV蛋白酶识别位点的C端,EW29标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;该带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白可自组装形成铁蛋白包封的蛋白笼纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白,其特征在于,所述TEV蛋白酶识别位点的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述铁蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白,其特征在于,表达所述EW29标签的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求2所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白,其特征在于,表达所述TEV蛋白酶识别位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,表达所述铁蛋白片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
5.权利要求1~4任一项所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白自组装形成的蛋白笼纳米颗粒。
6.权利要求5所述的蛋白笼纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:将EW29标签、TEV蛋白酶识别位点和铁蛋白片段的核苷酸序列串联,形成EW29标签/TEV蛋白酶识别位点/铁蛋白重组序列;
步骤2:将重组序列连接至pET21b中,构建重组载体;
步骤3:将重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中,经过诱导表达和亲和层析纯化,得到目的蛋白带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白;纯化的目的蛋白进行自组装形成蛋白笼纳米颗粒。
7.一种重组载体,其特征在于,所述的重组载体包含有如权利要求3~4任一项所述的核苷酸序列。
8.一种宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞包含有权利要求7所述的重组载体。
9.权利要求1~4所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白、权利要求5所述的带有半乳糖结合凝集素EW29标签的铁蛋白融合蛋白自组装形成的蛋白笼纳米颗粒、权利要求6所述的蛋白笼纳米颗粒的制备方法在制备疫苗中的应用。
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