[发明专利]一种血红蛋白半定量检测试剂及便潜血标本采集和检测的方法

说明书

本发明公开了一种血红蛋白检测试剂及便潜血标本采集和检测的方法，所述检测试剂包括：试剂A、试剂B和试剂C，所述试剂A为CTAB‑高氯酸溶液，所述试剂B为咪唑缓冲液，所述试剂C为0.9％NaCI溶液，所述试剂A、试剂B和试剂C的体积比20:4:11。用本方法进行便潜血半定量检测时，结果可以避免一些人为因素等的干扰，灵敏度大于定性实验(检测限100ug/ml)。本发明检测试剂主要用于检测便标本，也可以用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液等中血红蛋白含量。环保且质量可靠，与金标准法对比也很理想；同时，原料易得成本低，检测过程也较简单，也不存在免疫法的拖尾情况；用于便潜血测定的优势就更加明显。

技术领域

本发明涉及生物技术分析检测领域，尤其是一种血红蛋白半定量检测试剂及便潜血标本采集和检测的方法。

背景技术

血红蛋白是红细胞的主要成份。每个血红蛋白分子由4个血红素基团与珠蛋白构成，每个血红素又由4个吡咯环组成，在环中央有一个铁原子。血红蛋白中的铁在二价状态时，可与氧呈可逆性结合(氧合血红蛋白)，如果铁氧化为三价状态。血红蛋白则转变为高铁血红蛋白，就失去了载氧能力。测定血红蛋白含量使用的方法有四种：①比色法。这是临床上使用最广泛的方法，它可分为目视比色和光电比色两类，后者根据所用的稀释液不同，再分为氰化高铁血红蛋白法、碱化血红蛋白法、酸化血红蛋白及氧合血红蛋白法。良好的稀释液必须能使血中所有的血红蛋白都转变为一种稳定的血红蛋白衍生物，以便能测出血中血红蛋白总量。氰化高铁血红蛋白法基本上具备了这个优点，它能使除了硫化血红蛋白(正常人血中极少)以外的所有血红蛋白都变成稳定的氰化高铁血红蛋白。所以用这种方法测得的结果准确，重复性好。因此氰化高铁血红蛋白法已成为国际上测定血红蛋白的标准方法。血红蛋白目视比色法准确性差，国外已被淘汰。但该法简便，经济，目前仍在有些基层医疗单位使用。②化学检测法。③测氧法。此二方法复杂，不适于常规使用。④免疫法。该法准确性差。

血红蛋白检验主要用于血液检测了解贫血等疾病；大便及尿液隐血检测分别检测肠道和泌尿系统。现阶段，便潜血的检测主要方法包括：便潜血(fecal occult bloodtesting，FOBT)和免疫检测(fecal immunochemica occult blood testing，FIT)，前者其敏感度和特异性较低，化学法根据亚铁血红蛋白具有过氧化物酶的作用，可催化过氧化氢生成新生态氧，氧化联苯胺等底物生成有色化合物的原理设计，检测形式有化学法和干化学法，由于联苯胺对人体有致癌性，现在已很少使用，另外，外源性食物中动物血红蛋白、肌红蛋白、可引起假阴性；大量食蔬菜中含有活性的植物过氧化酶也可催化H₂O₂分解产生新生态氧导致假阳性；V-C、铁剂及其他还原物可中和氧化物不能产生新生态氧引起假阴性。检测中要排除这些干扰。后者免疫层析胶体金技术的缺点是双抗体夹心存在HOOK效应，主要集中在潜血试验项目中。HOOK效应是指在双位点夹心免疫试验中，其剂量反应曲线的高剂量区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，此现象称之为HOOK效应，即钩状效应。目前，对于潜血的免疫学检测一般需要多步稀释才能使其处于线性范围内，但这样造成的误差势必会加大。FOBT检测灵敏度高但线性范围较窄(200ng/ml-2000ng/ml)，而且FOBT易出现假阴性结果，原因如下：(1)若上消化道出血经过消化道酶降解或者消化已不具有原来的免疫抗原性。(2)过量的大出血而致使反应体系中抗原过剩出现后带现象(HOOK效应)。(3)病人的血红蛋白(haematoglobin，Hb)的抗原与单克隆抗体不匹配等。

粪便潜血试验(FOBT)是检测肠道损伤的一种常用方法，也是筛查结直肠癌的有效方法。目前实验室常用的FOBT方法中，常用化学法和免疫胶体金法，粪便潜血是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜均不能证实的出血。粪便潜血试验一般用化学试验来检测粪便中微量的、肉眼看不到的血液。但正常人24h的胃肠道生理性失血量约0.6ml，用高灵敏度的化学法潜血试验(可检出消化道出血1ml以上)一般也难以检出；用灵敏度更高、特异性强的免疫学方法有时可出现假阳性，故值得注意。

发明内容