[发明专利]一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法

权利要求书

1.一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将脐带取出后，用生理盐水洗去脐血管内及表面残存的血，在无菌操作台上剔除脐带外部的被膜和内部的三根血管，分离得到的透明胶状物质即为人脐带沃顿胶；

(2)用蒸馏水反复清洗沃顿胶两次，然后将沃顿胶放置在粉碎机中，加入三蒸水后开机粉碎，反复数次，直至沃顿胶呈匀浆状态；

(3)将步骤(2)制备的沃顿胶匀浆放入-20℃冰箱中进行冷冻，然后置于室温下融化，反复冻融3～4次；

(4)使用梯度离心法取上清液，依次加入TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)、胰蛋白酶、Tris-HCl缓冲液后轻轻搅拌进行洗脱，洗脱后，取上层匀浆置于离心机中经离心、弃上清、收集沉淀即得脱细胞纳米级脐带凝胶悬浮液；

(5)将步骤(4)制得的凝胶悬浮液放入模具后，利用真空冷冻压缩干燥机作用16小时获得单纯沃顿胶支架；

(6)配制一定浓度的含锌模拟体液，并将步骤(5)制备的单纯沃顿胶支架置于模拟体液中进行诱导沉积；所述含锌模拟体液的成分及含量为：NaCl：120～150mmol/L、NaHCO₃：2～4mmol/L、KCl：2～6mmol/L、K₂HPO₄·3H₂O：2～5mmol/L、HCl：20～40mmol/L、CaCl₂：2～4mmol/L、Na₂SO₄：0.2～1mmol/L、(CH₂OH)₃CNH₂(Tris)：30～50mmol/L、Zn(CH₃COO)₂：5～50mmol/L；

(7)取出步骤(6)中浸泡后的沃顿胶支架，放置于水热釜中的氨水溶液内，进行气相水热反应；

(8)将步骤(7)中制得的负载好锌离子的沃顿胶支架，置于真空冷冻干燥机中作用，然后进行辐照消毒，置于4℃冰箱中密封条件下保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的梯度离心的转速为6000r/min，离心15min。

3.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述TritonX-100的浓度为1％，胰蛋白酶的浓度为0.25％，Tris-HCl缓冲液的浓度为1mol/L，PH为6.8。

4.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述洗脱是在4℃下，洗脱24小时，重复5次。

5.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述洗脱后的离心是在4℃下，离心机转速为10000r/min，离心40min。

6.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述单纯沃顿胶支架置于模拟体液中在37℃下诱导沉积24小时。

7.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(7)中所述氨水溶液的浓度为5％～15％，在50～70℃下进行气相水热反应24～48小时。

8.根据权利要求1所述的一种具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤(8)中所述的辐照消毒的温度是60℃。

9.权利要求1～8任一项所述方法制备的具有抗炎功能的含锌离子组织工程支架。