[发明专利]一种液质联用测定血浆中普瑞巴林浓度的方法

权利要求书

1.一种液质联用测定血浆中普瑞巴林浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以普瑞巴林-d4为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的0.02μg/μL的内标普瑞巴林-d4溶液，混匀后加入1000μL的甲醇，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液40μL转移至装有1000μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；所述混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比50：50：0.05混合得到的混合物；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中普瑞巴林和内标普瑞巴林-d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的普瑞巴林浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Restek Allure PFPP，5μm，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积比为100：0.05混合得到的混合物；流动相B为甲醇：甲酸按照体积比100：0.05混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；

质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为550℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，普瑞巴林和普瑞巴林-d4的去簇电压均为80eV；普瑞巴林和普瑞巴林-d4的碰撞室入口电压均为14eV；普瑞巴林和普瑞巴林-d4的碰撞电压均为28eV；普瑞巴林和普瑞巴林-d4的碰撞室出口电压均为12eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z160.0→m/z55.1，其为普瑞巴林；和m/z164.1→m/z57.1，其为普瑞巴林-d4。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中普瑞巴林浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中普瑞巴林浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以普瑞巴林和内标普瑞巴林-d4的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的普瑞巴林的浓度。