[发明专利]一种液质联用测定血浆中苯海索浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中苯海索浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为苯海索的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～40ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中苯海索的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中苯海索浓度的方法。

背景技术

苯海索(Trihexyphenidyl)，化学名为(±)-α-环己基-α-苯基-1-哌啶丙醇，分子式为C₂₀H₃₁NO，分子量为：301.47，苯海索作为抗帕金森病药物，50年代就在国外上市，60年代开始陆续在国内上市。本品为中枢抗胆碱抗帕金森病药，用于治疗老年震颠病症，作用在于选择性阻断纹状体的胆碱能神经通路，而对外周作用较小，从而有利于恢复帕金森病患者脑内多巴胺和乙酰胆碱的平衡，改善患者的帕金森病症状。临床用于震颤麻痹，脑炎后或动脉硬化引起的震颤麻痹，对改善流涎有效，对缓解僵直、运动迟缓疗效较差，改善震颤明显，但总的疗效不及左旋多巴、金刚烷胺。用于轻症及不能耐受左旋多巴的患者，常与左旋多巴合用。肝豆状核变性。畸形性肌张力障碍、癫痫、慢性精神分裂症、抗精神病药物所致的静坐不能。也可用于药物引起的锥体外系疾患。

目前，现有关于苯海索测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中苯海索浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中苯海索浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以苯海索-d11为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的0.02ng/μL的内标苯海索-d11溶液，混匀后加入1000μL的甲醇，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液100μL转移至装有500μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；所述混合有机溶剂为甲醇：水：1mol/L的醋酸铵按照体积比73：27：0.1混合得到的混合物；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中苯海索和内标苯海索-d11的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的苯海索浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX XDB-C18，5μm，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：1mol/L的醋酸铵按照体积比100：0.1混合得到的混合物；流动相B为甲醇：水：1mol/L的醋酸铵按照体积比80：20：0.1混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；等度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.0min；

质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为8Psi，苯海索和苯海索-d11的去簇电压均为25eV；苯海索和苯海索-d11的碰撞室入口电压均为12eV；苯海索和苯海索-d11的碰撞电压均为30eV；苯海索和苯海索-d11的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z301.9→m/z98.1，其为苯海索；和m/z313.1→m/z98.1，其为苯海索-d11。