[发明专利]一种提高精液保存品质的精液保存液及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种提高精液保存品质的精液保存液，其特征在于，按体积份计算，包括：60-80份精液稀释基础液和20-30份卵黄液；

其中：

所述精液稀释基础液包括A液和B液；

每100ml A液包括如下成分：

混合糖4-9g，柠檬酸盐0.1-0.6g，氨基酸10-150mmol，缓冲试剂0.5-3g，抗生素10-80万IU；

所述B液为脱脂奶液。

2.根据权利要求1所述的精液保存液，其特征在于，所述氨基酸选自L-脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸中的一种或多种；

优选地，所述氨基酸为L-脯氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的精液保存液，其特征在于，所述混合糖选自葡萄糖、乳糖、棉子糖和海藻糖中的至少两种；

优选地，所述混合糖包括质量比为(3-8)：(0.1-0.5)：(0.1-0.5)的葡萄糖、乳糖和棉子糖；

更优选地，所述混合糖与所述氨基酸的比例为(5-7)g：(10-150)mmol。

4.根据权利要求1-3任一项所述的精液保存液，其特征在于，所述A液中：

所述柠檬酸盐选自柠檬酸钾、柠檬酸钠和柠檬酸钙中的一种或几种；优选地，所述柠檬酸盐为柠檬酸钠和柠檬酸钾的混合物，质量比为柠檬酸钠：柠檬酸钾＝(5-6)：(6-10)；

和/或，所述缓冲试剂选自HEPES、Tris、TES、MOPS和TAPSO中的一种或几种；

和/或，所述抗生素选自青霉素、链霉素、庆大霉素中的一种或几种，优选青霉素和链霉素按照(1-2)：1的比例复配。

5.根据权利要求1-4任一项所述的精液保存液，其特征在于，所述脱脂奶液中的脂肪含量低于0.1％、蛋白质含量高于3.0％；所述脱脂奶液中，脱脂奶粉的质量体积百分含量为5-20％；优选地，所述A液与B液的体积比为(4-6)：5；

和/或，

所述卵黄液中，卵黄的体积百分含量不低于15％；优选地，所述卵黄液中的其余成分为所述精液稀释基础液。

6.根据权利要求1～5任一项所述的精液保存液，其特征在于，所述精液保存液还包含1-10份甘油；或者，所述精液保存液还包含1-10份二甲基甲酰胺和1-10份维生素E。

7.权利要求1-6任一项所述的精液保存液在精液保存中的应用，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述的精液保存液进行精液的常温或低温保存，或者，采用权利要求6所述的精液保存液进行精液的冷冻保存。

8.权利要求1-6任一项所述精液保存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)配制A液，将混合糖、柠檬酸盐、缓冲试剂和氨基酸以灭菌超纯水定容后，加入抗生素，再使用0.22μm滤器过滤后备用；

2)将B液于115℃高压灭菌10-15min，冷却后备用；

3)将A液和B液混合，得到精液稀释基础液；

4)制备卵黄液；

抽取卵黄，加入所述精液稀释基础液后，在4℃条件下离心1h；去除沉淀保留上清液；

5)将精液稀释基础液、卵黄液混合或将精液稀释基础液、卵黄液和甘油混合，或将精液稀释基础液、卵黄液、二甲基甲酰胺和维生素E混合，即得。

9.一种保存精液的方法，其特征在于，利用权利要求1-5任一项所述的精液保存液进行精液的常温或低温保存；或者，利用权利要求6所述的精液保存液进行精液的冷冻保存；所述方法包括利用所述精液保存液稀释精液；

优选地，所述精液来自马属动物，包括公马、公驴、野马、野驴和斑马；

更优选地，所述稀释，是将精液与所述精液稀释基础液按照2：(1-3)的比例进行稀释，经平衡、离心后，再以所述冷冻保存液稀释至精液密度为(2-10)×10⁸个/mL。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，当利用权利要求6所述的精液保存液进行精液的冷冻保存时，在所述稀释后进行程序化冷冻，冷冻程序如下：

经程序化冷冻至-140℃后，将得到的冻精投入液氮中至少停留5min，之后即可进行保存。