[发明专利]蚯蚓肠道内容物强化土壤中四环素类抗生素消减的方法

权利要求书

1.蚯蚓肠道内容物在强化土壤中四环素类抗生素消减中的应用，其特征在于，首先选取具有明显环带，体重在3-5g的新鲜威廉环毛蚓，用中性PBS缓冲液清洗蚯蚓体表2-3遍，放在无菌培养皿中清肠6h；并插入冰浴暂存，静置10min，促使蚯蚓排粪完全，投放至10-100mg/kg的四环素类污染土壤中，保持避光和常温培养14天后，取出蚯蚓，再次进行体表清洗，放在培养皿中清肠，清肠的蚯蚓用25%无水乙醇将蚯蚓浸泡2min，观察蚯蚓在无水乙醇中的生理状态，当蚯蚓停止扭动身躯并逐渐静止，但仍能观察到蚯蚓心脏轻微跳动时，取出蚯蚓，用滤纸擦去蚯蚓体表无水乙醇，之后放置在冰上敞口的培养皿中2min，使蚯蚓体表的无水乙醇充分挥发；解剖获取新鲜蚯蚓肠道内容物，解剖获取新鲜蚯蚓肠道内容物的时间控制在5min之内；向新鲜蚯蚓肠道内容物中加入1mL的PBS缓冲液，再采用涡旋仪将内容物混合均匀，涡旋仪的转速为1500rpm，涡旋时间为10s；采集实际环境中四环素污染土壤，去除土壤中的杂质，再对土壤进行破碎筛分；然后向土壤中添加蚯蚓肠道内容物，按照土壤与蚯蚓肠道内容物的质量比500:1-1000:1进行混合，进行人工培养30-60天后完成修复。