[发明专利]一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂的制备方法

说明书

本发明提供了一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂的制备方法，该冻干剂有效组分及其重量份数比为：黄芪多糖30‑50份、蔗糖15‑40份、海藻糖5‑15份、蜂胶2‑5份、甘氨酸1‑5份、聚乙烯吡咯烷酮1‑2份、维生素C 0.5‑1份、大豆蛋白胨1‑5份。以上组分加蒸馏水混匀在120℃下灭菌15‑30分钟，制得冻干剂；冻干剂与犬细小病毒精制卵黄抗体按一定比例充分混匀，定量分装后立即进行冷冻干燥。本发明方法成本低，抗体效价高，生物安全性高，有效保证了所得犬细小病毒精制卵黄抗体的治疗效果。

技术领域

本发明属于宠物抗体保存技术领域，具体涉及一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂及其制备方法。

背景技术

人们生活水平提高的同时精神追求也不断刷新，尤其是社会空巢老人及丁克家族的增多，提升了宠物人类精神伴的地位，据2018年中国宠物白皮书统计，犬是人们饲养需求最多的一类宠物，养犬业的发展，随之而来的犬细小病毒病的防治也必须提上日程。

犬细小病毒(CPV)对犬具有高度的接触性传染性，各种年龄的犬均可感染，尤以刚断乳至90日龄的犬发病较多，病情也较严重。临床来看本病一年四季均可发生，病犬的粪便中含毒量最高。目前该病还没有有效的治疗方法和药物，常用的单克隆抗体和血清，保存期短，仅适合初期或者成犬使用，中期后效果并不明显，因此开发CPV抗体及其辅助诊断、治疗及保存新型试剂将有助于该病的防治。

发明内容

本发明的目的在于提供一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂的制备方法，解决现有犬细小病毒精制卵黄抗体低温冷冻保存，长途运输不方便等难题。

本发明的另一个目的在于提供一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂，缓解现有技术造成的免疫应激反应大，疫苗空窗期发病等问题。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂，该冻干剂有效组分及其重量份数比为：黄芪多糖30-50份、蔗糖15-40份、海藻糖5-15份、蜂胶2-5份、谷氨酸1-5份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、维生素C0.5-1份、大豆蛋白胨1-5份。

一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂，其特征在于：该制备方法的步骤为：

(1)按照重量配比分别称取黄芪多糖、蔗糖、海藻糖、蜂胶、谷氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、大豆蛋白胨，溶于45-65℃蒸馏水中得溶液A；

(2)将步骤(1)中溶液A在120℃下高压灭菌15-30分钟，2-8℃保存，得冻干剂；

(3)步骤(2)中所得冻干剂与犬细小病毒精制卵黄抗体溶液比为按体积比1：5-1：9充分混匀，冻干处理，即得本发明一种犬细小病毒精制卵黄抗体冻干剂。

作为优选，步骤(3)中所述犬细小病毒卵黄抗体的制备方法的步骤为：

a.取未经免疫的23周龄健康产蛋鸡，对其进行犬细小病毒弱毒疫苗3次免疫注射，免疫间隔为7天，用量0.5ml/只/次，检测血清抗体效价至1:256时收集高免蛋；

b.取步骤(3)-a所得高免蛋，用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆；

C.对步骤(3)-b中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌0.5～1.5小时，室温放置2～6小时后，以4200～5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌10-20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩3～4倍后再用NaOH调整PH值为6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:256的滤液，即犬细小病毒精制卵黄抗体溶液。