[发明专利]一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及其在试剂中的应用，所述引物组包括24组，所述的24组引物组的序列表如SEQ ID No.1‑72所示；所述试剂盒包含所述的24组引物组中的至少22组引物组；所述试剂包括24组引物组或所述试剂盒。引物经过了优化设计，具有相似的退火温度，能够实现24组引物在相同的PCR扩增条件下同时扩增，每个PCR反应体系的体积只有1.15μL，DNA模板只需5～10ng，大大增加了检测效率和反应灵敏度；应用该引物组进行检测，具有速度快、成本低、灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及应用。

背景技术

自1900年奥地利著名医学家Karl Landerstainer发现人类ABO血型系统后，截止到目前由国际输血协会(ISBT)认可的血型系统共有39种。ABO血型系统是人类血型系统中免疫原性最强的血型系统，也是经典的人类遗传标记，因此在输血医学、亲子鉴定、人类学研究、法医物证检验具有重要作用。

人类ABO基因位于9号染色体上(9q34.1-9q34.2)，由A、B和O三个复等位基因控制，包含28bp-691bp长度不等的7个外显子和约19514bp长度的6个内含子，其DNA序列高度保守，基因编码的产物是糖基转移酶，多数编码序列位于第6和第7外显子上，这些转移酶控制ABO血型抗原的生物合成，从而决定其血型。ABO血型差异主要与基因变化有关，ABO血型基因上存在丰富的单核苷酸多态性，通过分子生物学方法检测ABO血型基因的SNP位点，可以确定A、B、O或AB表型。

人类ABO血型检测方法主要有两种：一是经典的血清学方法，二是基因分型方法。目前常规检测方法是传统的血清学方法，该方法易受抗原活性、抗原多态性、抗体特异性、自身抗体、不规则抗体、微生物、疾病等因素影响，使得表型鉴定不准确，且在异常表达和遗传学分析时受到无法克服的局限性。随着分子生物学技术的发展，ABO血型基因分型的方法也越来越多，目前最主要的方法有限制性片段长度多态性PCR法(PCR-RFLP)、单链构象多态性PCR(PCR-SSCP)、特异序列引物PCR法(PCR-SSP)、实时荧光定量PCR法(RT-PCR)、测序法等。PCR-SSP方法需要进行多管扩增，多条带电泳，还存在判读易混淆所导致分型错误的分险。PCR-SBT分型方法最大的缺陷是操作过程非常繁琐，工作量大，难以实现高通量操作。ABO基因不同区域的扩增有不同的扩增条件，不仅需要的样本量大，同时增加了试剂耗材的消耗，且需要占用更多的仪器设备资源。综上所述，目前常见的这些方法存在以下几点问题：第一点实验操作复杂，步骤繁琐；第二点结果判读仍是人工方式；第三点样本通量较低；第四点成本较高。这些缺陷直接导致了ABO基因分型无法实现高通量的精准分型，难以适应将来越来越高的医疗需求。

因此，研发一种简单、便捷、快速、高通量、易于判读的ABO血型基因分型产品是具有重要意义的。

发明内容

本发明第一个目的在于提供一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组；本发明的第二个目的在于提供一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒及其制备方法；本发明的第三个目的在于提供引物组或试剂盒在制备用于检测人类红细胞ABO血型基因分型试剂中的应用。从而实现能够快速、低成本、高灵敏度、同时多位点联合检测地对人类血液进行ABO血型进行基因分型，适于临床应用。

本发明采用的技术方案如下：本发明针对ABO血型系统查阅大量相关文献及积累的实验数据，确定了所检测的10种常见的中国人群ABO血型亚型，及其对应的24个复等位基因SNP位点信息A101，A102(467CT)，A201(467CT,1061delC)，A205(467CT,1009AG)，B101(297AG,526CG,657CT,703GA,796CA,803GC,930GA,1096GA)，O01(261delG),