[发明专利]生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂包括生物炭基材料，以及生物炭基材料上吸附的菌株，所述菌株为中度嗜盐菌Martelellasp. AD-3，其保藏编号为CCTCC M 2011218，该菌株在2011年6月30日保存于中国典型培养物保存中心，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；

制备方法包括以下步骤：

（一）使用接种环从保存Martelellasp. AD-3的LB平板上，挑取一株菌株接种于5-10mL的营养剂溶液中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中活化24-48h；

（二）按照体积比1-5%的接种量取活化后菌液接种于含50-100 mg/L菲的3%LB培养基中扩大培养，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中活化36-48h，得到种子液；

（三）取定量种子液，以固化培养基重悬菌体，加入生物炭基材料，在20-35℃，转速为100-150r/min的振荡培养箱中固化24-72h后，获得所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂；

固化培养基（g/L）的组成为：蛋白胨 8.0-12.0；酵母粉 4.0-6.0；NaCl 24-36；AD-3菌量20-40×10⁶CFU/mL；

步骤（三）中，所述生物炭基材料的加入量以生物炭基材料重量与培养基的体积比计为1%-10%；

所述生物炭基材料包括棉杆生物炭、稻壳生物炭。

2.根据权利要求1所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（三）中，固化时间为48h。

3.根据权利要求1所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（三）中，所述生物炭基材料在加入前，进行灭菌处理。

4.根据权利要求1所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（三）中，固化培养后，以200目滤网过滤出生物炭菌剂，然后，以0.2 mol/L 的磷酸缓冲液洗涤菌剂，再加入固定液固定4h，离心去上清，洗涤2次，将样品置于30%、50%、70%、90%、100%的乙醇溶液中进行梯度脱水，冷冻干燥，得到所述生物炭基固定多环芳烃高效降解菌剂。