[发明专利]一种超敏心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒

说明书

本发明涉及一种超敏心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒。本发明提供超敏心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测来自受试者样品中心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体，其中所述抗体选自特异性结合下述cTnI片段的1‑6抗体：抗体1：27‑60aa；抗体2：69‑86aa；抗体3：13‑29aa；抗体4：25‑40aa；抗体5：41‑49aa；和抗体6：169‑178aa。本发明的方法和试剂盒灵敏度高，操作简单，可用于心肌肌钙蛋白I的动态监测。

技术领域

本发明涉及蛋白检测领域。具体而言，本发明涉及超敏心肌肌钙蛋白I的检测方法和试剂盒。

背景技术

血液心肌肌钙蛋白I(cTnI：cardiac troponin I)的升高对诊断心肌损伤/坏死(myocardial necrosis)具有非常高的敏感性和特异性。目前cTnI已成为心梗的临床诊断，治疗，监测必不可少的标志物。

心肌肌钙蛋白在正常人微量存在，但在心肌梗死发生时，心肌细胞毁损造成cTnI释放入血，无论ST段是否抬高，cTnI都会急剧升高，在24小时左右达到高峰，7-10天后下降至正常水平。cTnI升高的幅度与心肌细胞坏死程度有一定程度的关联。如果病人血中cTnI在下降过程中再次升高，意味着心肌再次损伤/坏死。cTnI浓度的变化与AC(AcuteCoronary Syndrome)危险程度、治疗决策和预后明确相关。

超敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)在急性心肌梗死患者诊断中具有着较高的灵敏度与特异性，对于提升急性心肌梗死的临床诊断准确率具有着非常关键的意义。超敏肌钙蛋白I的一般检测标准为：正常人第99百分位点处变异系数(CV)≤10％，临床可接受标准为≤20％，表观正常人检出率≥50％。所以和常规cTnI检测相比，hs-cTnI的灵敏度要求非常高，cTnI灵敏度的增加提高了早期AMI检测的检出率。但是在检验灵敏性提高的同时也增加了AMI和其他一些疾病中引起cTnI升高的阳性率，尤其是对于那些可能存在慢性心肌损伤的结构性心脏病患者。然而在大多数案例中，这种慢性心肌损伤一般不会表现出显著hs-cTnI的动态改变。所以，通过系列cTnI检测来判断随着时间变化的ΔcTnI可以有效鉴别AMI和结构性心脏病患者。

目前市面上也不断地涌入大量的POCT产品。然而，这些产品多采用某一段抗原表位的抗体对抗原进行检测，普遍存在漏检和无法达到正常人检出率≥50％。因此，当前试剂盒性能普遍达不到超敏的要求，比如检出率低、灵敏度特异性不够等，不能监测病情的发展趋势、不能满足检测不同时间患者血液中心肌肌钙蛋白含量变化等要求。

发明内容

发明人经过大量理论研究和实验摸索，充分考虑心肌肌钙蛋白I的结构特性，对各种待测超敏肌钙蛋白抗原区间和捕获抗体进行分析研究，并通过大量交叉实验和筛选，获得了能够用于超敏心肌肌钙蛋白I检测的超敏心肌肌钙蛋白I抗原区域组合。发明人已经证明针对所选抗原表位区域的抗体出乎意料的能够相互组合用于hs-cTnI的高灵敏度和特异性检测。发明人还令人吃惊地发现针对所选抗原表位区域的抗体能够相互补充各自检测的不足，提高检出率，并能够用于动态监测病情的发展趋势，能够随时监测受试者如心肌梗塞患者的cTnI含量，这对基层医院或者病房尤其重要。

在一些实施方案中，本发明可以包括下述一项或多项：

1.一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测来自受试者样品中心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体和第二组抗体各自包括选自下述抗体1-6中的至少两种以上的抗体，其中抗体1-6分别为能特异性结合下述氨基酸片段的单抗或多抗：

抗体1：心肌肌钙蛋白I氨基酸片段27-60；

抗体2：心肌肌钙蛋白I氨基酸片段69-86；

抗体3：心肌肌钙蛋白I氨基酸片段13-29；

抗体4：心肌肌钙蛋白I氨基酸片段25-40；