[发明专利]合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途

说明书

本发明公开了合成δ‑生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法及用途，方法为：将外源基因hpd,hpt和vte1整合到酿酒酵母BY4742菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01；在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02，本发明构建的一种合成δ‑生育三烯酚重组酿酒酵母菌株，能够以葡萄糖为碳源重头合成δ‑生育三烯酚，代替植物提取的方法。这种利用微生物合成δ‑生育三烯酚的方法的操作简便，同时能得到产量高的δ‑生育三烯酚。

技术领域

本发明涉及生物合成技术领域，更具体的说是涉及一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株及构建方法。

背景技术

维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。早在20世纪20年代就被人们发现，Evans和他的同事在研究生殖过程中发现，酸败的猪油可以引起大鼠的不孕症。在1936年分离出结晶体，1938年被瑞士化学家人工合成。维生素E包含一组八个结构相关的生育酚(tocopherols)和生育三烯酚(tocotrienols)，早期，因为生育三烯酚相比生育酚来说有很低的生物活性，对其研究较少。近来研究表明，生育三烯酚具有生育酚所没有的功能，如神经元保护作用以及降低胆固醇等作用。且生育三烯酚具有较强的抗肿瘤活性,可以在体外及体内抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期和抑制血管生成。具有很好的临床应用前景。δ-生育三烯酚是维生素E的一种异构体，由于其潜在的多样化生物医学应用，例如抗癌活性，预防骨质疏松症和降低胆固醇，最近受到了广泛关注。

到目前为止，根据关于维生素E市场前景的报告，市场上维生素E约80％来自化学合成，20％来自植物或种子的提取。然而，化学合成维生素E的过程中使用了有毒的催化剂，使得该过程对环境不友好，不可持续。然而，δ-生育三烯酚主要是从油棕和大米中提取的，很少有人对其微生物的生物合成进行研究。工程酿酒酵母可以作为生产δ-生育三烯酚的替代和有前途的方式，代替植物中的提取方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株。

本发明的第二个目的是提供一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法。

本发明的第三个目的是重组酿酒酵母菌株生产δ-生育三烯酚的用途。

本发明的技术方案概述如下：

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株的构建方法，包括如下步骤：将外源基因hpd,hpt和vte1整合到酿酒酵母BY4742菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株VE01；在重组菌株VE01基因组δ位点整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重组菌株VE02,所述hpd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；hpt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；vte1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；thmg1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；ggppssa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

上述方法构建的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株。

合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株生产δ-生育三烯酚的用途，包括如下步骤：将权利要求2的合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株VE02在发酵培养基中培养发酵，获得δ-生育三烯酚，所述发酵培养基的配方为35.66g/L葡萄糖、24.46g/L蛋白胨、14.01g/L酵母浸粉，余量为水。

本发明的优点：

本发明构建的一种合成δ-生育三烯酚重组酿酒酵母菌株，能够以葡萄糖为碳源重头合成δ-生育三烯酚，代替植物提取的方法。这种利用微生物合成δ-生育三烯酚的方法的操作简便，同时能得到产量高的δ-生育三烯酚。

附图说明

图1为酿酒酵母中的δ-生育三烯酚合成路径。