[发明专利]原位杂交滴片方法

说明书

本发明涉及一种原位杂交滴片方法，包括：a)提供用于承载细胞的载体以及待滴片的细胞悬液样本母液；b)向所述载体上滴加第一滴细胞悬液样本c)待所述第一滴细胞悬液样本在所述载体上基本铺展均匀、且其溶剂基本挥发完全后，在所述第一滴细胞悬液样本滴加位置处滴加下一滴细胞悬液样本；如此操作直至完成第n滴细胞悬液样本的滴加，n为≥2的整数；其中，所述第一滴细胞悬液样本至所述第n滴细胞悬液样本的滴加方式均为：将控制按钮处于非按压状态的移液器的吸液嘴插入所述细胞悬液样本母液液面下蘸取0.5μl～2μl的样本并将其放液至所述载体上。

技术领域

本发明涉及生物实验技术领域，具体而言，涉及一种原位杂交滴片方法。

背景技术

目前原位杂交(in situ hybridization，ISH)实验室在进行细胞的ISH样本制作时，滴片主要以吸管滴片法和普通加样枪滴片法为主。吸管滴片法要求细胞悬液多，吹打混匀后，用3ml吸管吸取一定体积的悬液，一滴(约50μl)或多滴滴在防脱玻片上(检测1个项目)，待扩散均匀至晾干；普通加样枪滴片法是针对悬液不太少的标本(≥200μl)，用200μl加样枪吹打混匀之后，吸取一定体积的悬液(约50μl)多次一小滴(约10μl)滴在防脱玻片上(检测1个项目)，待扩散均匀至晾干。

市面上有多孔玻片，包含10或12个单独的孔，常规性用于少量固定细胞样本的观察。与普通的标准显微镜玻片比，因为细胞被局限于相对较小的表面区域里，因此可以在FISH观察中提供更合适的细胞密度，同时由于细胞数下降，也节约了探针的用量。

然而，对于某些样本中丰度很低的样本——例如浆细胞样本——细胞经离心富集后细胞沉淀肉眼不可见，通常只加1滴固定液(约50μl)调成悬液用于制片吸管滴片法要求细胞悬液多，可使整张防脱玻片都分布细胞，但往往扩散不均匀，容易出现中间细胞少，四周细胞聚集的现象；普通加样枪滴片法可改善这一分布不均匀的现象，是由于吸取的悬液体积小，易扩散，可调节液体的体积多次覆盖在同一圆内。但针对细胞量过少的标本，需要选取体积更小、少量多次的集中滴片。上述两种方法都不适用于细胞量很少的标本，易造成细胞分布太散，后续杂交会出现部分细胞核无信号，可计数的细胞核不足100个，无法出具报告。此外，细胞分散也会导致后续技术员阅片困难，一是有效细胞核计数不足100个，往往整张片子一点点挪动视野一个个去找细胞核；二是杂交信号有区域性，信号强弱及模式不同，往往需要计数更多细胞核综合判读。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

吸管滴片法和普通加样枪滴片法通常用来制片细胞丰富的标本，由于这两种方法并未对吸取悬液的体积有高要求，且滴片位置不能完全一致，易造成细胞核分布过于分散，并且细胞悬液用量大，针对上述问题本发明涉及一种原位杂交滴片方法。

所述方法包括：

a)提供用于承载细胞的载体以及待滴片的细胞悬液样本母液；

b)向所述载体上滴加第一滴细胞悬液样本；

c)待所述第一滴细胞悬液样本在所述载体上基本铺展均匀、且其溶剂基本挥发完全后，在所述第一滴细胞悬液样本滴加位置处滴加下一滴细胞悬液样本；如此操作直至完成第n滴细胞悬液样本的滴加，n为≥2的整数；

其中，所述第一滴细胞悬液样本至所述第n滴细胞悬液样本的滴加方式均为：将控制按钮处于非按压状态的移液器的吸液嘴插入所述细胞悬液样本母液液面下蘸取0.5μl～2μl的样本并将其放液至所述载体上。

本发明通过用吸液嘴蘸取微量样本并分多次滴加，能够将细胞悬液样本中细胞在载体上进行富集，从而利于后续阅片时对细胞的观察与统计，也可以节约探针、封闭液等试剂的用量，并能够最大程度减少样本的损耗，实现少量样品即可有效提高检测效率与检出率。

附图说明