[发明专利]一种多测序平台通用接头、适用于多测序平台的文库构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种多测序平台通用接头，其特征在于，包括第一测序平台探针结合序列、第二测序平台探针结合序列、第一测序平台引物结合序列、第二测序平台引物结合序列、第一互补序列和第二互补序列；所述第一互补序列和所述第二互补序列反向互补，所述第一测序平台探针结合序列、所述第二测序平台探针结合序列、所述第一测序平台引物结合序列和所述第二测序平台引物结合序列中的至少两条序列分别与所述第一互补序列和所述第二互补序列连接；第一测序平台为Illumina高通量测序平台，所述第一测序平台探针结合序列为P5序列和P7序列；第二测序平台为Ion Torrent高通量测序平台，所述第二测序平台探针结合序列为P1序列；所述第一测序平台引物结合序列为Seq-read1序列和Seq-read2序列，所述第二测序平台引物结合序列为特异A序列；所述多测序平台通用接头包括第一接头序列和第二接头序列；所述第一接头序列从5’端到3’端依次包括P5序列、特异A序列、Seq-read1序列和第一互补序列，所述第二接头序列从5’端到3’端依次包括第二互补序列、Seq-read2序列、P1序列和P7序列；所述第一互补序列和所述第二互补序列完全互补，且在所述第一互补序列的3’末端有一个凸出的T碱基；或

所述多测序平台通用接头包括第一接头序列、第二接头序列、第一扩增引物和第二扩增引物；所述第一接头序列从5’端到3’端依次包括部分特异A序列、Seq-read1序列和第一互补序列，所述第二接头序列从5’端到3’端依次包括第二互补序列、Seq-read2序列和部分P1序列；所述第一扩增引物从5’端到3’端依次包括P5序列和部分特异A序列，所述第二扩增引物从5’端到3’端依次包括P7序列和部分P1序列；所述第一互补序列和所述第二互补序列完全互补，且在所述第一互补序列的3’末端有一个凸出的T碱基；所述第一扩增引物上的特异A序列和所述第一接头序列上的特异A序列有15～25bp的交叠，所述第二扩增引物上的P1序列和所述第二接头序列上的P1序列有15～25bp的交叠；或

所述多测序平台通用接头包括第一接头序列、第二接头序列、第三接头序列和第四接头序列；所述第一接头序列从5’端到3’端依次包括P5序列、Seq-read1序列和第一互补序列，所述第二接头序列从5’端到3’端依次包括第二互补序列和P1序列，所述第三接头序列从5’端到3’端依次包括第二互补序列、Seq-read2序列和P7序列，所述第四接头序列从5’端到3’端依次包括特异A序列和第一互补序列；所述第一互补序列和所述第二互补序列完全互补，且在所述第一互补序列的3’末端有一个凸出的T碱基。

2.根据权利要求1所述的多测序平台通用接头，其特征在于，所述第一接头序列的5’末端与所述第二接头序列的3’末端通过尿嘧啶连接。

3.根据权利要求1所述的多测序平台通用接头，其特征在于，所述第三接头序列的3’末端与所述第四接头序列的5’末端通过尿嘧啶连接。

4.根据权利要求1所述的多测序平台通用接头，其特征在于，所述多测序平台通用接头的序列具有5’磷酸化修饰、3’磷酸化修饰、甲基化修饰、硫代修饰、氨基修饰和生物素修饰中的一种或多种。

5.一种适用于多测序平台的文库构建方法，其特征在于，在完成DNA片段化、末端修复以及dA尾添加后将DNA片段与权利要求1～4任一项所述的多测序平台通用接头连接。

6.根据权利要求5所述的文库构建方法，其特征在于，在一个反应管中将DNA样本与快速酶混合液、快速缓冲液混合，一步完成DNA片段化、末端修复以及dA尾添加；然后DNA片段两端与多测序平台通用接头连接，所构文库即可同时在多个测序平台上进行高通量测序；所述快速酶混合液中含有DNA切刻内切酶I、DNA切刻内切酶II、切口消化酶、T4 DNA聚合酶、T4多聚核酸激酶、Klenow大片段、Klenow片段3’→5’exo-和rTaq DNA聚合酶中的多种或全部；所述快速缓冲液中含有Tris-HCl、MgCl₂、NaCl、dNTPs、ATP、DTT、BSA和Triton X-100中的多种或全部。