[发明专利]一种以丁香酚为底物发酵生成香兰素的方法

权利要求书

1.一种以丁香酚为底物发酵生成香兰素的方法，其特征在于：以丁香酚为底物，通过Penicillium simplicissimum OMK-68和Bacillus sp. OMK-69混合发酵获得香兰素；

其中，Penicillium simplicissimum OMK-68于2019年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，中国. 武汉. 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019827；Bacillus sp. OMK-69于2019年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，中国. 武汉. 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019826。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将Penicillium simplicissimum OMK-68和Bacillus sp. OMK-69经无菌YPD平板培养后，再将Penicillium simplicissimum OMK-68经第一种子培养基活化，将Bacillus sp. OMK-69经第二种子培养基活化，获得Penicillium simplicissimum OMK-68种子液和Bacillus sp. OMK-69种子液；

（2）将Penicillium simplicissimum OMK-68种子液接种于无菌的发酵培养基中，于发酵罐中进行发酵培养10-13h；

（3）将Bacillus sp. OMK-69种子液接种于步骤（2）所得的物料中，继续于发酵罐中进行发酵培养9-11h；

（4）在步骤（3）所得的物料中加入底物丁香酚，然后每间隔3-5h再添加与第一次添加等量的丁香酚，共添加5-7次，累计共添加丁香酚39-45g/L；

（5）在步骤（4）所得的物料中，纯化获得香兰素。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述第一种子培养基的配方为：麦芽浸粉28-32g/L，酵母粉13-16g/L，蛋白胨8-12g/L，磷酸二氢钾1.1-1.3g/L，氯化钠0.7-0.9g/L，溶剂为水，pH为自然pH。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：第二种子培养基的配方为：葡萄糖18-22g/L，酵母粉9-11g/L，蛋白胨8-12g/L，磷酸氢二钾0.7-0.9g/L，氯化钠0.7-0.9g/L，溶剂为水，pH为自然pH。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的配方为：葡萄糖28-32g/L，酵母粉18-21g/L，蛋白胨14-16g/L，硫酸镁0.25-0.32g/L，磷酸二氢钾0.9-1.1g/L，氯化钠0.7-0.9g/L，硫酸铵0.9-1.1g/L，溶剂为水，pH为自然pH。

6.一种Penicillium simplicissimum OMK-68，其特征在于：于2019年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，中国. 武汉. 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019827。

7.权利要求6所述的Penicillium simplicissimum OMK-68在以丁香酚为底物发酵生产松柏醇中的应用。

8.一种Bacillus sp. OMK-69，其特征在于：于2019年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，中国. 武汉. 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019826。

9.权利要求8所述的Bacillus sp. OMK-69在以松柏醇为底物发酵生产香兰素中的应用。