[发明专利]一种枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD突变体，所述突变体将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第46位、第104、第126位、第88位的氨基酸中的一个或多个进行突变。

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体为以下(a)～(e)：

(a)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第46位突变为缬氨酸，突变体命名为I46V；

(b)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第104位突变为丝氨酸，突变体命名为K104S；

(c)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第46位和104位同时进行突变，分别突变为缬氨酸和丝氨酸，突变体命名为I46V/K104S；

(d)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第46位、第104位、第126位同时进行突变，突变体命名为I46V/K104S/I126*；

(e)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶BsPanD的第46位、第88位、第104位、第126位同时进行突变，突变体命名为I46V/I88M/K104S/I126*。

3.编码权利要求1或2所述的突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的载体或重组微生物细胞。

5.一种重组载体，其特征在于，携带权利要求4所述突变体基因BsPanD及EcAspA基因；所述EcAspA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。

6.一种含有权利要求5所述重组载体的重组菌。

7.一种β-丙氨酸的制备方法，其特征在于，所述方法是以L-天冬氨酸为底物，以权利要求1～2任一所述突变体为催化剂。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，突变体的添加量为为终浓度10～60g/L，在pH5.5～8.0、30～40℃、通气量为1～6vvm条件下反应10～15h。

9.一种β-丙氨酸的制备方法，其特征在于，所述方法是以富马酸为底物，以权利要求6所述重组菌所产的酶为催化剂。

10.权利要求1～2任一所述突变体或权利要求6所述重组菌在制备β-丙氨酸中的应用。