[实用新型]一种黑色素肿瘤细胞联合定量检测卡

说明书

本实用新型公开了一种黑色素肿瘤细胞联合定量检测卡，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；通过微通道与加样区连接的废液区；与废液区连接的收集区；所述述结合区、检测区、废液区的底部均并联有微通道；结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀。本实用新型通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的黑色素肿瘤细胞通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。

技术领域

本实用新型涉及微流控技术和免疫荧光微球免疫层析技术相结合的技术领域，具体涉及一种黑色素肿瘤细胞联合定量检测卡。

背景技术

黑色素瘤，又称恶性黑色素瘤，是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。在亚洲人和有色人种中，原发于皮肤的黑色素瘤占50％～70％，最常见的原发部位为肢端(约占所有黑色素瘤的50％)，即足底、足趾、手指末端及甲下等部位，其次为粘膜黑色素瘤(约占20％左右)，而欧美白种人这两种亚型仅占所有黑色素瘤的5％。欧美白种人中过度的紫外线照射是明确病因之一。紫外线可致使皮肤灼伤，并诱导DNA突变，进而诱导黑色素瘤发生。此外，光敏型皮肤、存在大量普通痣或发育异常痣以及皮肤癌家族史者均为高危人群。不恰当的处理有可能诱发色素痣恶变和迅速生长，如刀割、绳勒、盐腌、激光和冷冻等局部刺激。内分泌、化学、物理因素对黑色素瘤的发生是否有影响还不得而知。黑色素瘤是皮肤肿瘤中恶性程度最高的瘤种，容易出现远处转移。早期诊断和治疗因而显得尤为重要。目前对于黑色素瘤的诊断与监测手段主要有S100蛋白、糖蛋白肿瘤抗原-免疫复合物(TA90-IC)、乳酸脱氢酶(LDH)、神经原特异性烯醇化酶(NSE)、丝氨酸/苏氨酸激酶(BRAF)等血清肿瘤标志物检测。

微流控技术(Microfludics)是指在至少有一维为微米甚至纳米尺度的低维通道结构中控制体积为皮升至纳升的流体进行流动并传质、传热的技术。实现微流控操控的主要方法就是将流体限制在一个微米甚至纳米尺度的通道中，流体在微流控的微通道中具有独特的流体性质，如层流、液滴等等。当微通道在微米甚至纳米尺度时，微通道表面积与其内部体积比很大，通道的结构、形状和壁面性质都对流体的流动状态产生极大影响。因此，微流控可以实现一系列常规方法难以完成的微加工和微操作。时间阀的作用就是在固定的时间内控制通过微通道的流体的流速和流量，可以严格控制整个反应的时间并且控制进入检测区的流体的量。

荧光微球是指将荧光团通过包埋、共价键连接等方式引入有机或无机纳米粒子中，并让纳米粒子承担有机小分子荧光染料的检测、标记等功能，具有相对稳定的形态结构以及发光行为。荧光微球免疫层析技术是继胶体金免疫层析技术后，在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，与胶体金免疫层析技术一样具有快速、操作简便等优点。

目前临床检验黑色素肿瘤的手段，诸如血清鉴定、医学影像扫描、组织病理学切片等。如利用血清鉴定，由于个体差异导致有些黑色素肿瘤缺乏高度特异性的标志物不能被有效检出，其可靠性较差；医学影像扫描可以非侵入地、快速地对患者的黑色素肿瘤情况进行评估，但即使是最先进准确的影像检测方法,黑色素肿瘤检出直径至少也要在2～3mm，即小于该直径范围的黑色素肿瘤通过影像学检查往往不能被发现，所以只能应用于癌症中晚期的检测；组织病理学切片往往根据穿刺或术后取出的黑色素肿瘤组织才能鉴定，且技术要求较高，无法做到反复多次、长期或随时获取，此外，该方法还具有一定的创伤性且不能准确判定是否有转移情况发生。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种黑色素肿瘤细胞联合定量检测卡，其灵敏度高、操作简单、携带方便且制备成本低。使用的荧光微球基本不受外界环境介质变化的影响，稳定性好，染料荧光猝灭大大减少。使用微流控技术设置时间阀的孔径在8μm，使得黑色素肿瘤细胞能够通过时间阀并富集。具体技术方案如下：