[实用新型]一种单克隆抗体筛选平台有效
申请号: | 201920905211.8 | 申请日: | 2019-06-14 |
公开(公告)号: | CN210856160U | 公开(公告)日: | 2020-06-26 |
发明(设计)人: | 张晓;夏庆杰;杨澜;杨平 | 申请(专利权)人: | 成都医学院 |
主分类号: | C12M3/06 | 分类号: | C12M3/06 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 曾克;施磊 |
地址: | 610000 四川省*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 单克隆抗体 筛选 平台 | ||
本实用新型公开的一种单克隆抗体筛选平台,包括:培养板,培养板外套,单克隆细胞培养室,抗体过滤器;所述培养板上设有呈阵列排列的园孔,园孔是圆形培养管的上缘;所述的圆形培养管中有一呈长方形的细胞培养室,细胞培养室的两侧有单克隆抗体的筛孔和超滤膜。所述抗体过滤器位于细胞培养室长边的两侧;所述抗体过滤器由抗体筛孔和超滤膜组成,孔径以能够通过抗体蛋白为标准;所述抗体筛孔的孔径大于抗体尺寸而小于细胞尺寸;所述超滤膜的孔径大于抗体尺寸而小于细胞尺寸。本实用新型提供的单克隆抗体筛选平台,不仅简化了单克隆抗体的操作,而且还实现了单克隆抗体大规模、高效率和高通量的筛选。
技术领域
本实用新型属于生物技术实验装置领域,尤其涉及一种单克隆抗体筛选平台。
背景技术
杂交瘤细胞(hybridoma)是一种在制备单克隆抗体过程中,用骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合而成的细胞。融合成功后两个不同来源的细胞核在同一细胞中表达功能。B淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长,小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖,即具有所谓永生性。所以在选择培养基的作用下,只有B淋巴细胞与骨髓瘤细胞成功融合的杂交细胞才是同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞,这种杂种细胞叫做杂交瘤细胞。
单克隆抗体(monoclonal antibody)是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。为了得到针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体通常采用杂交瘤(hybridoma)技术。
但是,单克隆抗体不管是作为检测试剂,还是作为具有巨大市场前景的治疗药物。首先,我们都需要通过筛选找到产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。传统的单克隆抗体制备方法主要是杂交瘤技术。这是目前比较成熟,技术难度比较低,大多数实验室仍然在使用的方法。在单克隆抗体制备过程中,有两次筛选过程,第一次是使用选择性培养基选出杂交瘤细胞;第二次就是进一步选出能产生我们需要的抗原特异性抗体的杂交瘤细胞。
目前,对杂交瘤细胞的筛选通常采用有限稀释法,但是这种方法有以下的缺陷:
1、人工操作,操作及重复的步骤太多,不可避免容易出错。
2、速度慢,效率低。只能保证30-40%的孔有细胞生长。对于高通量筛选来说,不能满足要求。
3、不能保证细胞的单克隆,需要经过3-4次亚克隆进行筛选,所以,人工和耗时都较多。
4、有限稀释在ELlSA检测前,并不知道哪一个克隆满足抗原特异性的要求。所以,需要对所有克隆,都要最少做一次鉴定。
另外,细胞分选仪或者流失细胞技术也有以下的问题:
1、由于必须要对细胞表面或内部使用荧光标记,所以,一般主要使用于胞内表达的蛋白或者膜表达蛋白。对于分泌表达的杂交瘤细胞来说,使用具有局限性。
2、具体检测的是单个细胞在某个时间点的荧光强度。所以,检测结果容易受细胞周期的影响。而且,单个细胞的表达水平也不能很好反应后期生产阶段细胞群体的表达水平。
3、流失筛选技术只是对荧光信号强的所有细胞作出划分,后期需要复筛的细胞数目仍然很多,下游工作量仍然比较大。
4、由于对单个细胞使用压力操作,剪切力会降低细胞存活率。所以,低成活率也成为这个技术的一个主要缺陷。
发明内容
本实用新型旨在提供一种单克隆抗体筛选平台,不仅简化了单克隆抗体的操作,而且还实现了单克隆抗体高效率和高通量的筛选。
为达到上述目的,本实用新型采用的技术方案如下:
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