[实用新型]用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条

说明书

本实用新型涉及一种用于LAMP或RT‑LAMP的一体化试纸条，包括试纸条主体，试纸条主体包括上层片、下层片和中层片；上层片与下层片固连形成套状构件；中层片安置于套状构件内并构成移动副；上层片设有样本孔、洗脱孔、试剂孔、反应槽以及染料孔；下层片设有第一废液孔和第二废液孔；第一废液孔与样本孔位置对应，第二废液孔与洗脱孔位置对应；中层片设有反应点，反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。采用本实用新型后，可直接在试纸条上通过加试剂的方式实现核酸抽提，同时不需要配制整个反应体系，能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果，摆脱对自动仪器的依赖，尤其适用于现场检测场景。

技术领域

本实用新型涉及一种用于LAMP或RT-LAMP的一体化试纸条，属于核酸检测辅助装置技术领域。

背景技术

据发明人所知，一些相同症候群传染病(如病毒性出血热系列有发热伴出血，病毒疹系列有发热伴出疹等)，它们的主要临床表现相似，早期难以鉴别诊断，最终病因确认有赖于病原检测，尽快筛查并明确诊断对控制疫情至关重要。由于传染病疫情的突发性和快速蔓延性，最好能在现场第一时间展开快速病原检测，因为患者标本或虫媒标本从现场或野外辗转后送至具备条件的实验室，往往距离较远，耗时长，延误救治和防控，并且标本易失活造成假阴性，此外还存在一定的传播隐患。然而，目前针对传染病病原的现场检测手段相对单薄，仍以胶体金试纸条为主，存在灵敏度低、检测谱窄、钩状效应等问题，常致假阴性。

核酸检测是早期、可靠、敏感的方法。然而常规PCR及DNA探针杂交技术因假阳性高等问题不适合临床诊断；实时荧光定量PCR技术灵敏度高，可靠性好，为全封闭反应，但该技术需要价格昂贵的荧光定量PCR仪，并且要保证高特异性往往需要荧光标记探针，检测成本较高，需要注意的是，精密贵重仪器对质量控制、操作环境和人员的专业能力要求较高，难以在基层卫生部门和防疫机构推广使用，也难以直接用于现场检测。

与上述各检测手段相比，LAMP(环介导等温扩增反应)或RT-LAMP(逆转录环介导等温扩增反应)方法应能更好地在现场进行早期病原学筛查。

LAMP/RT-LAMP方法具有较高特异性和抗干扰能力，只有当引物组与目的片段的6-8个区域都匹配上时才能进行扩增；反应体系稳定可靠，在室温下放置2周后仍然稳定，并且对于样品中原有或污染的无关、干扰片段仍然不敏感，而其他类似技术则无法做到这一点；敏感性较高，扩增快速、高效，1小时内产物量可达约10¹⁰倍，逆转录反应和LAMP扩增可同时进行，扩增效率和检测灵敏度可比普通RT-PCR高10-100倍左右；结果鉴别相对简便，如检测反应管的沉淀浊度就能判断扩增与否，也可在管盖或管底蜡封(高熔点)SYBR荧光染料直接观察反应后的颜色变化即可判断，或直接在反应体系加入不影响扩增效率的羟基萘酚蓝染料(hydroxy naphthol blue,HNB)来大幅度增强显色。总之，LAMP/RT-LAMP方法对于样品处理、操作技术和仪器设备的要求都比较低，更适宜于现场检测、医疗机构(如各类中小医院、社区医院等)、床边检验(Point of care testing,POCT)等场景下使用。

然而，将LAMP/RT-LAMP方法推广应用于以上现场检测等场景同样存在瓶颈问题：一方面该方法需抽提核酸，手工操作繁琐，或需要配置价格较昂贵的全自动核酸提取仪；另一方面该方法需要配制反应体系，整合度不高。因此，亟待研制出能克服上述技术问题的技术手段，以利于LAMP/RT-LAMP方法在现场检测、医院临床诊断中的应用。

经检索发现，申请号CN201610710500.3、申请公布号CN106337085A的中国发明专利申请，公开了一种核酸检测卡及其使用方法，包括封口膜、卡体、试剂孔、核酸扩增试剂、反应孔、核酸收集试纸、配套使用的核酸纯化试剂、冲洗缓冲液、防止溶液挥发的有机相。打开封口膜，将病原体样本加入到封装有核酸收集试纸的反应孔中，经核酸纯化试剂和冲洗缓冲液自动冲洗数次后，将试剂孔内的核酸扩增试剂分别加入每个对应的反应孔，在防止溶液挥发的有机相保护下，进行核酸扩增反应，反应的结果可通过配套使用的光学检测仪进行定性与定量分析。