[实用新型]一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抑菌实验箱

说明书

本发明公开了一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抑菌实验箱，包括体外抑菌实验箱体，所述体外抑菌实验箱内侧设置有培养基放置板架，所述培养基放置板架上方放置有培养基放置板，所述培养基放置板上方的中间位置设置有隔离突起板，所述养基放置板上开设有培养基放置槽，所述体外抑菌实验箱外侧转动连接有外门板，所述外门板中部设置有玻璃观察窗。本发明涉及动物传染病防控技术领域。该猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抑菌实验箱，能有效抑制猪胸膜肺炎放线杆菌的生长实验时用于实验的对比放置，整体结构简单，方便操作和实用，并且对照组实验操作时使用简单，分离明显，方便观察。

技术领域

本实用新型涉及动物传染病防控技术领域，具体为一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抑菌实验箱。

背景技术

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)是一种革兰氏阴性菌，造成猪胸膜肺炎与肺部出血性坏死，引起猪只呼吸道的严重疾病，急性病例死亡率可达80％以上，慢性经过者生长发育受阻，易继发其他病原感染而死亡。猪场一旦感染本病就很难根除，其原因在于存在慢性感染和带菌猪只。本病是国际上公认的危害现代养猪业的重大疾病之一，给各国养猪业造成了巨大的经济损失。

目前，研究人员已经从胸膜肺炎放线杆菌中鉴定到了4种RTX毒素、荚膜多糖(CP)、脂多糖(LPS)、外膜蛋白(OMP)、转铁结合蛋白(Tbp)、溶血素(Hly)、粘附素、蛋白酶毒力因子，同时这些毒力因子免疫特性也得到研究。在猪传染性胸膜肺炎疫苗的研制上取得一些进展，研发的疫苗主要有灭火疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗。研究发现，灭活疫苗免疫猪，再攻毒发现猪仍然会出现较严重的呼吸系统症状，抗体检测表明，灭活疫苗免疫后产生的抗体效价偏低，此外，由于APP存在不同血清型且交叉保护性差，灭活疫苗只能对其相应的血清型提供保护，不同血清型之间缺少交叉保护，同血清型不同菌株之间也缺少保护。根据发现的APP毒力因子的免疫特性研制出的重组亚单位疫苗及多组分亚单位疫苗改善了传统疫苗交叉保护保护性差的不足，但由于亚单位疫苗制作工艺复杂、成本偏高，阻碍了亚单位疫苗的商品化。研究发现，基因工程疫苗具有良好的交叉保护性，具有良好的保护率并能够显著降低感染带来的损伤，同时还能够不同程度抵抗病原在肺部组织的定殖，但由于安全性问题的存在，APP基因工程疫苗仍然处在实验室研究阶段。

为了解决以上疫苗在实际应用中存在的问题，开发一种安全、高效、廉价的新型疫苗将成为APP防控的更有效手段。研究发现，微生物为了附着于宿主细胞通常会采用诸如黏膜纤毛运转的方法来避免被清除。处于粘附状态时会增加微生物对宿主的毒性作用，从而提高它们对有害因素的抵抗力，并增强它们攫取营养的能力，使它们比那些没有粘附于宿主细胞的微生物繁殖得更快，更有效率。曾有报道指出，除了脂多糖以外，一些其他的粘附素也可以使胸膜肺炎放线杆菌更容易地粘附于黏膜表面。而根据对菌毛特性及功能的研究，人们推测所谓的“其他粘附素”很可能就是菌毛。APP菌毛基因簇大小为5303bp，含有ApfA，ApfB，ApfC和ApfD等4个基因，以及部分假定的radA基因和yacE基因。其中ApfA，ApfB，ApfC和ApfD基因内均含有完整的ORF，而radA基因和yacE基因内则含有部分ORF。在APP菌毛基因簇内，最主要的基因就是ApfA，该基因编码的蛋白与流感嗜血杆菌、伴放线放线杆菌、多杀性巴氏杆菌以及睡眠嗜血杆菌的菌毛蛋白的同源性达到了81％，研究表明，菌毛在革兰氏阴性菌如淋球菌、卡他莫拉菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠致病性大肠杆菌、绿脓杆菌的发病机制中发挥了重要作用，参与了粘附、定植、运动、生物膜形成、蛋白质输出和DNA摄取等作用过程。研究发现编码ApfA基因的结构蛋白在12个典型的猪胸膜肺炎放线杆菌血清型中均有存在，且每个血清型菌株ApfA的ORF长度均为447bp，其同源性则达到了95％以上，这说明ApfA蛋白在12个血清型中是高度保守的。因此，根据ApfA在不同血清型APP菌株中的高度保守性，可做如下构想：加入了菌毛ApfA蛋白的疫苗不仅有可能提供对血清型同型菌株感染的保护，而且还可能提供对异型APP菌株感染的交叉保护作用，也就是说，菌毛ApfA蛋白可作为疫苗的候选抗原蛋白开发成对不同血清型APP菌株具有交叉免疫保护力的疫苗，应用于猪传染性胸膜肺炎的防控。