[发明专利]用于制造用于基于序列的遗传检验的对照的组合物和方法

权利要求书

1.一种方法，所述方法包括：

提供获得自受试者的多个双链模板核酸；

将通用衔接子连接至所述模板核酸的两端，从而形成包括侧翼是所述通用衔接子的模板核酸的多个衔接子-模板-衔接子分子，

其中所述通用衔接子包含双链核酸的区域；并且

用第一通用引物和第二通用引物扩增所述多个衔接子-模板-衔接子分子，从而生成扩增的衔接子-模板-衔接子分子；

从所述扩增的衔接子-模板-衔接子分子的两端除去所述通用衔接子的至少一部分，从而生成除去的通用衔接子和多个再生的模板核酸(reDNA)。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述双链模板核酸是DNA。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述双链模板核酸包括无细胞DNA(cfDNA)。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者是孕妇，并且其中所述双链模板核酸包括胎儿和母体核酸的混合物。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述多个双链模板核酸包括cfDNA。

6.如权利要求4所述的方法，其中所述胎儿不包含遗传病症。

7.如权利要求4所述的方法，其中所述胎儿包含遗传病症。

8.如权利要求6或7所述的方法，其中所述遗传病症是非整倍性。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述非整倍性是三体性。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述三体性是21三体性、18三体性、13三体性、9三体性、8三体性、22三体性、XXX、XXY、或XYY。

11.如权利要求9或10所述的方法，其中所述遗传病症包括核苷酸序列的表现不足。

12.如权利要求1所述的方法，其中怀疑所述受试者具有赘生物。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述多个双链模板核酸包括循环肿瘤DNA和无细胞正常DNA。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述多个双链模板核酸包括血液、尿液、痰液、或粪便。

15.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括：在连接前，处理所述多个双链模板核酸，从而将末端修饰为平端。

16.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括：在连接前，处理所述多个双链模板核酸，从而将3’端修饰为作为3’突出结构终止。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述通用衔接子进一步包括单链非互补核酸链的区域，所述区域包括至少一个通用引物结合位点，并且其中所述连接将所述通用衔接子的双链核酸的区域共价附接至所述模板核酸的各端。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述扩增包括指数式扩增反应。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述指数式扩增反应包括聚合酶链式反应(PCR)。

20.如权利要求1所述的方法，其中所述扩增包括具有低错误率的DNA聚合酶。

21.如权利要求1所述的方法，其中所述通用衔接子包括限制性内切核酸酶识别位点，并且所述除去包括将所述扩增的衔接子-模板-衔接子分子暴露于限制性内切核酸酶，并且切割所述衔接子-模板-衔接子分子，从而生成除去的通用衔接子和多个reDNA。