[发明专利]具有氨基的配体的固定化方法

说明书

本发明提供牢固地固定配体、并且剩余甲酰基的失活优异的固定化方法。本发明的将对目标化合物具有特异性亲和性且具有氨基的配体固定于含有甲酰基的不溶性基材的方法的特征在于包括以下工序：通过将上述配体和上述含有甲酰基的不溶性基材混合而形成亚胺的工序、以及通过使用2种以上的还原剂对亚胺进行还原的工序。

技术领域

本发明涉及将具有氨基的配体高效率地固定于含有甲酰基的不溶性基材的方法。

背景技术

对特定的化合物具有特异性亲和性的肽、酶的底物等生物活性物质通过固定于不溶性的基材，可以回收、检测与被固定的生物活性物质发生相互作用的物质，因此可提高其利用性。例如，在亲和色谱中，通过将与目标化合物特异性结合的生物活性物质作为配体而固定于不溶性多孔粒子，可以从混合液中效率良好地仅对目标化合物进行回收。作为亲和色谱的工业利用例，可以举出：使用了被固定的蛋白质的免疫球蛋白分离、使用了被固定的抗体的抗原分离。

作为将配体固定于不溶性基材的方式，为了减少被固定的配体的泄漏，以牢固的共价键进行固定在工业利用上是极其重要的。另外，同时，被固定的配体的状态也是很重要的，优选配体在保持了活性的状态下被固定。

作为将配体固定于不溶性基材的方法，例如，开发了如下方法，该方法包括：将甲酰基导入不溶性基材，使该甲酰基与具有氨基的配体反应而形成亚胺，通过还原性氨基化反应进行固定，所述还原性氨基化反应是通过对亚氨基进行还原而形成稳定的胺的反应(专利文献1)。

另外，公开了通过在相同的反应中使用专利文献2所示的各种特定的还原剂，从而可以显著地抑制配体的泄漏量的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2015-110224号公报

专利文献2：国际公开第WO2017/034024号小册子

发明内容

发明要解决的课题

然而，本发明人等发现，专利文献1的方法存在对配体泄漏量进行改进的余地，另外，专利文献2的方法在剩余的甲酰基的失活方面存在进行改进的余地。

本发明对于上述改进点进行解决，提供抑制配体泄漏量且剩余的甲酰基的失活优异的固定化方法。

解决课题的方法

本发明人等为了解决上述的课题而进行了深入研究，结果发现，通过使用2种以上的还原剂，可以更可靠地将配体固定于不溶性基材，并且能够减少剩余的甲酰基，从而完成了本发明。

即，本发明涉及下述的[1]～[9]。

[1]将具有氨基的配体固定于含有甲酰基的不溶性基材的方法，该方法包括：

通过将所述配体和所述含有甲酰基的不溶性基材进行混合，从而形成亚胺的工序；以及

通过使用2种以上的还原剂，从而将所述亚胺还原的工序。

[2]根据上述[1]所述的方法，其中，通过分别添加所述2种以上的还原剂，从而将所述亚胺还原。

[3]根据上述[1]或[2]所述的方法，其中，作为所述还原剂，使用以pKa为6.5以下的路易斯碱为配位基的硼烷络合物之后使用其它还原剂，从而将所述亚胺还原。

[4]根据上述[3]所述的方法，其中，所述pKa为6.5以下的路易斯碱是含氮杂环式芳香族化合物。

[5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的方法，其中，使用肽作为所述配体。

[6]根据上述[5]所述的方法，其中，所述肽能够发生抗体特异性结合。