[发明专利]表达嵌合抗原受体的调节性T细胞

说明书

本发明提供了调节性T(Treg)细胞，其表达嵌合抗原受体(CAR)，其包含：a)至少一个抗原结合结构域，b)跨膜结构域，和c)胞质信号传导结构域，其包含至少一个初级胞质信号传导结构域和至少CD137的共刺激信号传导结构域，其中所述抗原结合结构域特异性结合在靶细胞的表面上表达的抗原或与在靶细胞的表面上表达的抗原结合的标签化多肽的标签或可溶性抗原。还公开了包含所述Treg细胞的组合物，以及激活的表达所述CAR的Treg的富集和分析的方法。

技术领域

本发明涉及在免疫细胞中表达的，特别是在调节性T细胞中表达的嵌合抗原受体的领域。

背景技术

可以操纵常规T细胞(Tcon)以改善对病原体或肿瘤的识别和破坏。调节性T细胞(Treg)包含具有免疫抑制功能的T细胞的亚组。可以操纵Treg以预防或治疗自身免疫，移植排斥，过敏症和慢性炎性疾病。

嵌合抗原受体(CAR)作为用于产生抗原特异性调节性T细胞(Treg)的有前途的替代物而出现。除TCR以外，CAR是人工受体，其含有可以独立于MHC来结合表面抗原的抗体型特异性。CAR-T细胞对特定抗原的特异性识别是通过抗体衍生单链可变片段(scFv)来介导，该片段具有经由跨膜区与细胞内TCR衍生信号传导结构域偶联的细胞外间隔结构域(Gross等，1989；Kuwana等，1987)。在鼠模型中，对髓鞘碱性蛋白具有反应性的重定向CAR-Treg能够改善EAE(Mekala和Geiger，2005)，而且对2,4,6-三硝基苯酚(TNP)或癌胚抗原(CEA)具有特异性的CAR-Treg也被成功地重定向至结肠，在那里它们高度有效地抑制结肠炎及其相关结直肠癌的发展(Blat等，2014；Elinav等，2009；Elinav等，2008)。最近，人CAR-Treg被重定向至作为移植中常见的错配抗原的HLA-A2，并已显示出抑制异种GvHD(MacDonald等，2016；Noyan等，2017；Boardman等，2017)。此外，已证明CAR-Treg具有缓解过敏性气道炎症(Skuljec等，2017)并阻止中和针对小鼠中的VIII因子的免疫反应(Yoon等，2017)的潜力。McGovern等(2017,Frontiers in Immunology,Vol.8,Art.1517pp:l-6)回顾了表达CAR的Treg的最新技术水平。

据我们所知，到目前为止已在Treg中使用的CAR构建体具有CD28共刺激结构域。

作为体外产生抗原特异性Treg的前提，识别疾病相关靶抗原仍然是一个重大挑战。此外，由于缺少允许特异性识别Treg并测试其具体激活要求的标记物，对CAR-Treg功效的功能分析受到限制。这对于产生最佳Treg CAR构建体和产生优化的Treg移植物是重要的，其是最大的CAR相关Treg功能活性和最小的效应T细胞污染的原因。因此，对于可以与Tcon显著不同的CAR-Treg的激活和扩增的要求的了解仍然很少。

本领域中需要表达CAR的调节性T细胞，其可用于治疗受试者以防护或治疗各种各样的免疫相关疾病，例如自身免疫，移植排斥，过敏症或慢性炎性疾病。

本领域中还需要产生表达CAR的高度纯化和功能优化的调节性T细胞，其可用于治疗受试者以防护或治疗所述免疫相关疾病。

发明内容

对于治疗性应用而言，拥有纯Treg细胞群且能够评估CAR构建体对Treg功能的影响(其可能与对Tcon的要求不同)是至关重要的。但是，体外Treg群体通常被Tcon细胞污染，并且这两个群体不容易彼此分离。从包含激活的调节性T细胞和激活的常规T细胞的样品中识别并分离出真正的激活的Treg是分析特定CAR构建体对Treg的体外作用以及随后它们在体内的功能的要求。因此，定义最佳CAR介导的Treg功能活性的激活和产生优化的CAR Treg的条件的任务迄今为止尚未得到解决。

这样的识别和分离可以通过EP2306191B1中公开的方法来执行。