[发明专利]神经细胞培养材料及神经损伤治疗剂

说明书

如果为了再生医疗的目的而欲实际移植到体内，则在灭菌处理和包装工序中需要高度的安全措施，如果欲采用新材料，则对实施者有很大负担。另一方面，现有的胶原现在也在其它用途中应用于体内移植，在移植方面的实际成果好。但是，尚未证明现有的胶原能有效地起到神经损伤的治愈作用。此外，现有的LASCol对于维持神经细胞的存活的效果是未知的。包含LASCol的神经细胞培养材料具有良好地维持神经细胞的存活的效果。此外，包含LASCol的神经损伤治疗剂即使在机体内也能使内在的神经细胞浸润或良好地增殖，从而可使神经突起迅速地延伸、联结，在针对神经损伤的BBB评分中具有可见改善的效果。

技术领域

本发明涉及包括培养神经细胞时的支架材料的培养材料以及使用该培养材料的神经损伤治疗剂。

背景技术

现在，要求使受到损伤的中枢神经恢复。为了实现这一点，需要进行神经细胞的培养，维持机体内的神经细胞的存活，以及促进机体内的神经细胞的突起延伸，重建神经回路。

在神经中，脑和脊髓这样的中枢神经系统受到损伤的情况下，不会自然修复。这是因为，中枢神经系统的神经细胞具有不易分裂增殖的性质，通过机体反应在损伤部位生成被称为胶质瘢痕的硬质而缺乏柔软性的纤维组织，神经纤维无法越过该胶质瘢痕而延伸。此外，也可例举如下原因：机体内存在阻碍神经突起延伸的因子(例如Nogo、MAG、OMgp、Sema3A等)，在这些因子的作用下，神经突起的延伸受到阻碍。

神经细胞与其它细胞不同，由细胞体和从细胞体延伸出的轴突以及它们的附带细胞构成。因此，神经细胞的培养中，除了维持神经细胞的生存以外，还需要促进轴突等的延伸。

但是，以往的细胞培养中使用的含血清的培养基并不足以促进神经细胞、神经母细胞、神经干细胞之类的脆弱细胞的增殖，而且含血清的培养基显著促进非神经细胞的增殖，因此存在培养出的全部细胞中非神经细胞所占的比例极高这一不理想的问题。于是，提出了在每1升培养基中含有至少2mg库尼兹型蛋白酶抑制剂(日文：クニッツ型プロテアーゼ阻害剤)的神经细胞培养用培养基(专利文献1)。

专利文献2公开了将含有聚乳酸等机体吸收性聚合物和胶原的组合物成形为板状、丝状、网状结构的神经再生导向器。专利文献2中，将其移植到大鼠的坐骨神经切断部，经过一定时间后取出神经，用肉眼确认坐骨神经的再生。

此外，专利文献3公开了一种移植用支架材料，其是在由生物降解性高分子构成的纤维状结构体的一端结合针状磁性体而成的移植用支架材料，或者是在由生物降解性高分子构成的纤维状结构体的内腔中插入针状磁性体而成的移植用支架材料，所述生物降解性高分子选自聚乙醇酸、聚乳酸、乙醇酸/乳酸共聚物。

专利文献3中，如BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分(运动麻痹的评价分数)所示，在对脊髓损伤大鼠移植该支架结构体的情况下确认了大鼠的运动恢复。

如这些文献所示，因为神经细胞需要轴突这一突起的延伸，所以在(包括体内的生长在内的)培养中需要具有机体亲和性或生物降解性的支架。

如专利文献2中所介绍的，胶原是具有机体亲和性且容易获取的材料。已知胶原有多种类型。胶原具有α链的三螺旋结构。专利文献4中记载了通过用规定的酶将该α链的末端切断而制成的低粘合性胶原(Low Adhesive Scaffold Collagen：以下也称为“LASCol”)。LASCol作为细胞培养用支架的材料是已知的(专利文献4)。

与现有的使用胶原的支架相比，通过采用使用LASCol的支架，欲培养的细胞形成凝集块(球状体)，可在更接近于机体内的三维状态下对欲培养的细胞进行培养(专利文献4)。此外，该LASCol对于干细胞的分化促进有效果(专利文献5)。

另外，作为使用增殖因子TGF-β1的中枢神经损伤治疗剂，在专利文献6中有介绍。

现有技术文献

专利文献