[发明专利]抗PD-1/抗HER2天然抗体结构的异源二聚双特异性抗体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种抗PD‑1/抗HER2天然抗体结构的异源二聚双特异性抗体及其制备方法。更具体地，本发明提供了一种具有天然IgG特征而在重链和轻链之间没有错配的高度稳定的异源二聚抗PD‑1/抗HER2双特异性抗体及其制备方法。

技术领域

本发明涉及抗PD-1/抗HER2天然抗体结构的异源二聚双特异性抗体及其制备方法，更具体地，涉及一种具有天然IgG特征而在重链和轻链之间没有错配的高度稳定的异源二聚抗PD-1/抗HER2双特异性抗体及其制备方法。

背景技术

单克隆抗体是仅作用于单一抗原表位的高度特异性抗体，已被广泛用于许多疾病的治疗，例如癌症、炎性疾症、自身免疫性疾病和感染性疾病。但是，这种治疗分子在单独使用时，该治疗分子不能显示出足够的药效。这可能是由于疾病的复杂性。例如，癌症或炎性疾病通常涉及多种疾病介导的分子通路以及信号通路之间的相叉作用。在这些情况下，靶向单一靶标的分子不能提供最佳的治疗效果。通过同时阻断多个靶标或者阻断同一靶标的多个位点处的分子能够改善治疗效果。由于多特异性分子、例如双特异性分子是单一分子，多特异性分子可以使得进行双靶向治疗可以简化新药的开发过程。与使用多个单特异性分子组合相比，使用多特异性分子对于患者和医疗服务提供者都更方便。

许多不同形式的双特异抗体或双功能分子已在该领域被报道。最初的双特异抗体是通过应用化学方法使用双功能偶联试剂将IgG分子、Fab’或(Fab’)2片段连接而制备的。但是，这种化学偶联的双特异性抗体具有很多的局限性，例如生产的劳动强度、异源偶联物和同源偶联物的纯化、以及去除初始单特异性抗体或其片段的复杂性；以及低收率。

用于产生双特异性抗体的另一种方法是使用杂交-杂交瘤(或四源杂交瘤)技术，其是采用体细胞融合两种分泌不同抗体的杂交瘤细胞系。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机配对，仅有抗体的1/10是所需的功能性双特异性抗体，这因而可能使纯化过程复杂化并降低产率。

WO2013/060867公开了一种大规模生产异源二聚双特异性抗体的方法。在该方法中，首先还原两种混合的同源二聚抗体。然后，在这两种同源二聚抗体的CH3区中引入不对称氨基酸突变，从而促使不同抗体的Fab臂交换。最后，通过氧化铰链区的链间二硫键来形成稳定的双特异性抗体。

WO2009/089004公开了一种用于制备异源二聚蛋白质的方法。在该方法中，在CH3-CH3界面处的氨基酸突变为带电荷氨基酸，从而通过静电作用促进异源二聚体的形成。然而，该方法不利于同源二聚体的形成。

US5,731,168公开了一种利用“突起-腔”策略来制备异源二聚IgG的方法。在该方法中，通过用较大的氨基酸侧链替换来自第一多肽的CH3结构域的界面的小氨基酸侧链来构建“突起”，并且在该多肽的CH3结构域的界面中产生补偿性“腔”。突起和腔之间的相互作用有利于异源二聚IgG的形成，并且在同源二聚体的形成中无效。

WO2012/058768描述了一种制备高度特异性稳定的异源二聚IgG的方法。该方法组合了阴性和阳性设计以及结构和计算机模型指导的蛋白工程技术，并且允许待设计的IgG1CH3结构域中的多个突变的新型组合，从而形成同源二聚体杂质含量低的稳定异源二聚IgG。

程序性死亡受体-1(PD-1)近期作为免疫检查点受到关注，其参与T细胞活化的调控，并且调节免疫应答的强度和持续时间。在正常情况下，PD-1可以介导和维持机体组织的自身免疫耐受，并防止在炎性反应过程中免疫系统的过度活化及其自身组织的伤害，因此提供了积极作用。然而，在病理情况下，PD-1参与各种肿瘤和自身免疫疫病的发生和发展(Anticancer Agents Med Chem.2015；15(3):307-13.Hematol Oncol Stem CellTher.2014年3月；7(1):1-17.Trends Mol Med.2015年1月；21(1):24-33.Immunity.2013年7月25日；39(1):61-73.J Clin Oncol.2015年6月10日；33(17):1974-82.)。