[发明专利]生产Hu14.18K322A单克隆抗体的方法

说明书

提供了一种通过将哺乳动物细胞培养物在包含植物蛋白水解物和稳定葡萄糖浓度的培养基中培养来生产Hu14.18K322A单克隆抗体的分批补料方法，其中所述方法产生滴度和非岩藻糖基化百分率提高的Hu14.18K322A单克隆抗体群体。

引言

本申请是2018年2月15日提交的美国申请系列号62/630,971的部分接续申请案，所述美国申请的内容整体通过引用并入本文。

背景技术

产品质量属性对于治疗性抗体的功能和可制造性来说至关重要。它们可能受到大量生产过程参数例如细胞培养基的显著影响。生长和补料培养基的组成，包括氨、谷氨酰胺、葡萄糖和金属离子的浓度，可以影响抗体的糖基化。因此，在培养基开发和优化过程中，至关重要的是监测和考虑培养基对糖基化的影响。对于其作用机制包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的治疗性抗体来说，降低已知影响ADCC活性的N-聚糖岩藻糖基化是特别重要的。参见例如Shinkawa等，(2003)J.Biol.Chem.278(5):3466-73；Niwa等，(2004)Cancer Res.64:2127-2133；Jefferis等，(1998)Immunol Rev.163:59-76；Shields等，(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740。因此，对于获得高抗体滴度和适合的岩藻糖基化以提高治疗性抗体的功效，存在着极大兴趣。

解决岩藻糖基化的一种方法聚焦于使用产生去岩藻糖基化抗体的优化的宿主细胞系。参见例如Kanda等，(2006)Biotechnol.Bioeng.94:680-688；Yamane-Ohnuki等，(2004)Biotechnol.Bioeng.87:614-622；WO 2017/079165和US 2009/0214528。另外，过程参数例如pH、克分子渗透压重量浓度、温度以及氨基酸、脂质和离子(例如锰)的增补等可以调节抗体的糖基化。参见例如Konno等，(2012)Cytotechnology64:249-26；Hossler等，(2009)Glycobiology 19:936-949；Trummer等，(2006)Biotechnol.Bioeng.94:1033-44；Miller等，(1988)Biotechnol.Bioeng.32:947–965；WO 2013/114165；WO 2015/140700；US2016/0362714；WO 2007/070315；US 2015/0344579和WO 2017/120347。

尽管对细胞培养过程来说存在着提供特定岩藻糖基化谱的必要性，但更重要的是，对于特定重组蛋白来说应该选择用于调节岩藻糖基化聚糖含量的条件，以便不影响或显著改变任何其他聚糖谱的量或水平。此外，用于获得特定岩藻糖基化谱的条件的组合应该对所述过程的滴度和/或生产率没有显著影响。因此，本发明提供了一种用于提高抗体的量和所述抗体的非岩藻糖基化两者的细胞培养方法。

发明内容