[发明专利]一种低分子量硫酸软骨素及其制备方法

权利要求书

1.一种低分子量硫酸软骨素，其特征在于：所述低分子量硫酸软骨素的平均分子量低于1000道尔顿，其分子量分布范围窄，主要以硫酸软骨素二糖和硫酸软骨素四糖为主，硫酸软骨素二糖含量占比为43～60％，硫酸软骨素四糖含量占比为30～45％，硫酸软骨素二糖和硫酸软骨素四糖含量之和大于87％；所述低分子量硫酸软骨素的结构通式如下式I所示：

式I：n＝0～5，R₁,R₂,R₃＝-H或-SO₃Na。

2.根据权利要求1所述的低分子量硫酸软骨素，其特征在于：所述低分子量硫酸软骨素的平均分子量为590～830Da，进一步优选为677～742Da。

3.根据权利要求1所述的低分子量硫酸软骨素，其特征在于：所述低分子量硫酸软骨素中硫酸软骨素二糖含量占比为48～55％，硫酸软骨素四糖含量占比为35～40％。

4.一种权利要求1～3任一项所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：将大分子硫酸软骨素原料经过硫酸软骨素裂解酶的酶解得到平均分子量可稳定地控制在低于1000道尔顿的低分子量硫酸软骨素产物，其分子量分布范围窄，产物主要以硫酸软骨素二糖和硫酸软骨素四糖为主，硫酸软骨素二糖含量占比为43～60％，硫酸软骨素四糖含量占比为30～45％，硫酸软骨素二糖和硫酸软骨素四糖含量之和大于87％；所述低分子量硫酸软骨素的结构通式如下式I所示：

式I：n＝0～5；R₁,R₂,R₃＝-H或-SO₃Na。

5.根据权利要求4所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：所述硫酸软骨素裂解酶从海岸边、河边、农贸市场、屠宰厂和食堂处的土样、污水或淤泥中筛选、鉴定，并用大肠杆菌或枯草芽孢杆菌优化表达得到。

6.根据权利要求4所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：所述大分子硫酸软骨素原料来源于陆生和海洋动物的软骨组织，包括鸡软骨，猪软骨，牛软骨或鲨鱼骨中的一种或几种混合。

7.根据权利要求6所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：所述大分子硫酸软骨素原料来源于鲨鱼骨。

8.根据权利要求4所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：酶解反应的操作条件为，所述硫酸软骨素裂解酶相对每升发酵液的添加量为100～300U/L，大分子硫酸软骨素原料的浓度为100～700g/L，酶解时间为6～10h，酶解温度为25～35℃，搅拌转速为100～700rpm，酶解pH为6.5～8.5。

9.根据权利要求4所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：酶解反应后的水解液通过混合溶剂脱除蛋白，水解液与混合溶剂的体积比为2～5:1，混合溶剂中二氯甲烷和异丙醇的体积比为3～5:1，100～500rpm搅拌10～40min，3000～5000rpm离心10～30min，取上层反应液。

10.根据权利要求4所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：酶解反应后的水解液通过超滤的方式脱除蛋白得到反应液。

11.根据权利要求9所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：将脱除蛋白后的上层反应液，经过0.22um囊式滤芯过滤除菌，然后将反应液加入到8～12倍体积量的无水乙醇中，醇沉，真空干燥。

12.据权利要求10所述的低分子量硫酸软骨素的制备方法，其特征在于：将脱除蛋白后的反应液，经过0.22um囊式滤芯过滤除菌后进行喷雾干燥。