[发明专利]cAMP受体蛋白变体及使用其制备L-氨基酸的方法

说明书

本申请涉及cAMP受体蛋白变体、包括其的微生物、以及通过使用其制备L‑氨基酸的方法。

技术领域

本公开涉及cAMP受体蛋白变体、包含其的微生物、以及使用其生产L-氨基酸的方法。

背景技术

CRP(环AMP受体蛋白)，又称CAP(分解代谢物激活物蛋白)，是大肠杆菌(E.coli.)中最众所周知的转录调节物。CRP的特点在于具有碳源依赖性的调节机制，其以“分解代谢物阻遏”为代表。这种作用是由细胞内环AMP(下文称为“cAMP”)的浓度触发的。当优选碳源(如葡萄糖)存在时，腺苷酸环化酶的活性被抑制以降低cAMP，且这一信号抑制了分解代谢基因的表达。在相反的情况下，腺苷酸环化酶的活性增加，且结果抑制了阻遏物并启动了分解代谢基因的表达。此外，已知CRP发挥多种作用，如通过cAMP的细胞内信号转导、渗透压调节、对细胞紧急情况的应答、生物膜生成、固氮、铁转运等。

据报道，已知有418个大肠杆菌的基因受CRP调节，但对应的调节机制尚未被明确揭示(J Biol Eng.(2009)24；3:13)。对于如此大范围的调节能力，CRP具有通过突变显示出多种表型的潜能。由于CRP的优点，其已被作为适合于对菌株(可适用于各种环境)在细胞水平上进行重新设计的对象进行研究。最近，已经进行了各种实验，如通过改变通过生物信息学选择的CRP的氨基酸变异来改变DNA结合程度而改变待调节基因表达的方法(NucleicAcids Research,(2009)37:2493-2503)，使用通过锌指DNA结合位点和CRP的融合制备的人工转录因子(ATF)来选择耐热、耐渗透、和耐低温的大肠杆菌的方法((Nucleic AcidsResearch,(2008)36:e102)等。换句话说，由于CRP表达的改变促进下游基因表达中的大范围变化，CRP可能是用于制备具有有用性状的微生物的良好工具。

发明内容

[技术问题]

本发明人已经开发了在SEQ ID NO:1的氨基酸序列中包括一个或多个氨基酸取代的新型蛋白质变体，并且他们发现该蛋白质变体可以增加L-氨基酸生产能力，从而完成了本公开。

[技术方案]

本公开的目的是提供cAMP受体蛋白变体。

本公开的另一目的是提供编码cAMP受体蛋白变体的多核苷酸。

本公开的又一目的是提供包括多核苷酸的载体。

本公开的又一目的是提供包括变体的埃希氏菌属(genus Escherichia)的微生物。

本公开的又一目的是提供生产L-氨基酸的方法，该方法包括在培养基中培养埃希氏菌属的微生物。

本发明的又一目的是提供变体或包括变体的埃希氏菌属的微生物在L-氨基酸的生产中的用途。

[有益效果]

当培养产生L-氨基酸的埃希氏菌属的微生物(微生物包括本公开的cAMP受体蛋白变体)时，以高产率产生L-氨基酸是可能的。因此，在工业方面，可以期望生产成本的降低以及生产的便利性。

具体实施方式

下面将详细描述本公开。同时，本公开中公开的每个描述和实施方式也可应用于其它描述和实施方式。即，在本公开中公开的各种要素的所有组合都落入本公开的范围内。进一步，本公开的范围不应受下文描述的具体描述的限制。