[发明专利]新型CRISPR/Cas12f酶和系统

权利要求书

1.一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的蛋白，其是CRISPR/Cas系统中的效应蛋白。

3.一种缀合物，其包含权利要求1或2所述的蛋白以及修饰部分。

4.权利要求3所述的缀合物，其中，所述修饰部分选自另外的蛋白或多肽、可检测的标记，或其任意组合。

5.权利要求3所述的缀合物，其中，所述修饰部分任选地通过接头连接至所述蛋白的N端或C端。

6.权利要求4所述的缀合物，其中，所述另外的蛋白或多肽选自表位标签、报告基因序列、核定位信号(NLS)序列、转录激活结构域、转录抑制结构域、核酸酶结构域，具有选自下列的活性的结构域：核苷酸脱氨酶活性、甲基化酶活性、去甲基化酶活性、转录激活活性、转录抑制活性、转录释放因子活性、组蛋白修饰活性、单链RNA切割活性、双链RNA切割活性、单链DNA切割活性、双链DNA切割活性和核酸结合活性；或其任意组合。

7.权利要求6所述的缀合物，其中：(i)所述转录激活结构域是VP64；(ii)所述转录抑制结构域是KRAB结构域或SID结构域；(iii)所述核酸酶结构域是Fok1。

8.权利要求3所述的缀合物，其中，所述缀合物包含表位标签。

9.权利要求3所述的缀合物，其中，所述缀合物包含NLS序列。

10.权利要求9所述的缀合物，其中，所述NLS序列如SEQ ID NO:19所示。

11.权利要求9所述的缀合物，其中，所述NLS序列位于所述蛋白的N端或C端。

12.权利要求3-11任一项所述的缀合物，其是融合蛋白。

13.权利要求12所述的缀合物，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。

14.一种复合物，其包含：

(i)蛋白组分，其选自：权利要求1或2所述的蛋白、权利要求3-13任一项所述的缀合物，或其任意组合；和

(ii)核酸组分，其从5’至3’方向包含SEQ ID NO：7或13所示的核酸序列和能够与靶序列杂交的导向序列，

其中，所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物。

15.权利要求14所述的复合物，其中，所述核酸组分是CRISPR/Cas系统中的导向RNA。

16.权利要求14所述的复合物，其中，所述复合物不包含反式作用crRNA(tracrRNA)。

17.权利要求14所述的复合物，其中，所述导向序列连接于所述核酸序列的3’端。

18.权利要求14所述的复合物，其中，所述导向序列包含所述靶序列的互补序列。

19.一种分离的核酸分子，其包含：

(i)编码权利要求1或2所述的蛋白，或权利要求12或13所述的缀合物的核苷酸序列；和

(ii)SEQ ID NO：7或13所示序列的编码序列。

20.权利要求19所述的分离的核酸分子，其中，(i)或(ii)所述的序列经密码子优化用于在原核细胞或真核细胞中进行表达。

21.一种载体，其包含权利要求19或20所述的分离的核酸分子。