[发明专利]检测癌症患者中的肿瘤抗原的诊断性测定法

权利要求书

1.一种用于测定样品中肿瘤细胞的存在的诊断性测定法,该诊断性测定法包含下述步骤:

a)使该样品与包含抗原结合域和识别域的抗原结合分子接触,其中该抗原结合域包含能够特异性结合该肿瘤细胞的靶抗原结合模块；

b)使该样品与嵌合抗原受体(CAR)表达性报告T(CAR-T)细胞接触,其中该报告CAR-T细胞包含:

i.能够特异性结合该识别域的CAR,其中该CAR与响应元件可操作偶联；

ii.在该响应元件控制下的报告基因；和

c)通过测量该报告基因的表达来测定T细胞激活以建立该肿瘤细胞的存在。

2.权利要求1的诊断性测定法,其中该抗原结合域是Fab片段且该识别域是Fc域。

3.权利要求1或2任一项的诊断性测定法,其中该抗原结合分子是IgG类抗体,特别是IgG1或IgG4同种型抗体。

4.权利要求3的诊断性测定法,其中该识别域是突变型Fc域,其中该突变型Fc域与非突变型亲本Fc域相比包含至少一处氨基酸替代,其中该CAR能够特异性结合该突变型Fc域但不能够特异性结合该非突变型亲本Fc域。

5.权利要求4的诊断性测定法,其中该突变体Fc域包含选自由人IgG1 Fc(SEQ ID NO:132)的残基117,118,136,180,193,212,214,和318组成的组的位置处的氨基酸替代,特别是其中该突变体人IgG1 Fc包含人IgG1 Fc(SEQ ID NO:132)的残基117处亮氨酸变成丙氨酸,残基118处亮氨酸变成丙氨酸,残基136处异亮氨酸变成丙氨酸,残基180处天冬酰胺变成丙氨酸,残基193处组氨酸变成丙氨酸,残基212处脯氨酸变成甘氨酸,残基214处脯氨酸变成甘氨酸,和/或残基318处组氨酸变成丙氨酸的氨基酸替代。

6.权利要求4或5任一项的诊断性测定法,其中该突变体Fc域包含人IgG1 Fc(SEQ IDNO:132)的残基212的位置处的氨基酸替代,特别是其中该突变体Fc域包含人IgG1 Fc(SEQID NO:132)的残基212处脯氨酸变成甘氨酸的氨基酸替代。

7.权利要求1至3的诊断性测定法,其中该识别域包含标签,其中该CAR能够特异性结合包含该标签的识别域但不能够特异性结合不包含该标签的识别域。

8.权利要求7的诊断性测定法,其中该标签是半抗原分子,特别是其中该半抗原分子选自由生物素,洋地黄毒苷(DIG)和荧光素(FITC)组成的组。

9.权利要求7的诊断性测定法,其中该标签是多肽标签,特别是其中该多肽标签选自由myc标签,HA标签,Avi标签,FLAG标签,His标签,GCN4标签,和NE标签组成的组。

10.权利要求1至9任一项的诊断性测定法,其中该CAR包含至少一个细胞内刺激性信号传导和/或共刺激性信号传导域。

11.权利要求10的诊断性测定法,其中该细胞内信号传导和/或共信号传导域的激活导致该响应元件的激活。

12.权利要求1至11任一项的诊断性测定法,其中该响应元件的激活导致该报告基因的表达。

13.权利要求1至12任一项的诊断性测定法,其中该样品是自罹患疾病的个体衍生的患者样品,特别是其中该疾病是癌症。