[发明专利]索马鲁肽、利拉鲁肽和GLP-1的化学-酶法合成

权利要求书

1.制备包含序列P_q-W_v-His-X-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly的偶联产物的方法，所述方法包括将以下(c)和(d)酶法偶联：

(c)包含由式P_q-W_v-His-X-Glu-(硫)酯表示的第一肽片段的肽C-末端酯或硫酯；和

(d)包含第二肽片段的具有N-末端未保护的胺的肽亲核试剂，所述第二肽片段包含序列H-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly，

其中

-P表示在所述肽C-末端酯或硫酯的N-末端α-氨基官能团处的保护基团，并且q是具有1或0的值的整数；

-W表示一个或多个可能相同或不同的α-氨基酸残基，并且v是代表α-氨基酸残基W的数目的具有1或更大的值的整数；

-X是Ala或α-氨基异丁酸单元(Aib)；

-Y是Lys，所述Lys具有游离的侧链ε-氨基或被保护基团保护的侧链ε-氨基或者用氨基酸或另一个官能团官能化的侧链ε-氨基，所述另一个官能团特别是选自γ-Glu-OH、Pal-γ-Glu-OH、AEEA-AEEA-γ-Glu-OH和AEEA-AEEA-γ-Glu-N-17-羧基十七烷酰基-OH的官能团，其中Pal是棕榈酰基，并且AEEA-AEEA是2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰基-2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰基；

-Z是Arg或Lys；

所述酶法偶联由连接酶催化，其中所述连接酶是枯草杆菌蛋白酶BPN’的变体。

2.根据权利要求1所述的方法，其还包括从所述包含序列P_q-W_v-His-X-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly的产物除去“P_q-W_v”部分，以便获得具有序列His-X-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Z-Gly-Arg-Gly的肽，其中P、q、v、W、X、Y和Z如权利要求1中所定义。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中v是1。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中与His相邻的W选自Phe、Leu、Ile、Val、Ala、Tyr、Met、Pro和Trp，优选为Phe、Leu、Val或Ile，最优选为Phe。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中P是Edman型保护基团，优选为取代的硫代氨甲酰基，更优选为苯基硫代氨甲酰基或甲基硫代氨甲酰基。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中合成了索马鲁肽。

7.根据权利要求6所述的方法，其包括将以下(a)和(b)酶法偶联：

(a)由式P_q-W_v-His-Aib-Glu-(硫)酯表示的肽C-末端酯或硫酯；和

(b)包含序列H-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Y-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly的肽亲核试剂，其中Y是Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-N-17-羧基十七烷酰基-OH)。